1mol/l-Tris-HCl Buffer Solution(pH 8.0)

公司名称: NACALAI TESQUE

产品编号: 35435-11

Efficient Large DNA Fragment Knock-in by Long dsDNA with 3′-Overhangs Mediated CRISPR Knock-in (LOCK) in Mammalian Cells

Wenjie Han, Haojun Liang and Jianqiang Bao

Published online: 2023-10-20

Bio-protocol()

Company-protocol()

Other protocol()

Genotyping-free Selection of Double Allelic Gene Edited Medaka Using Two Different Fluorescent Proteins

Author:

Yu Murakami, Satoshi Ansai, Akari Yonemura and Masato Kinoshita,

Date:

2017-12-20

[Abstract] This protocol describes a simple genotyping using two different colors of fluorescent protein genes inserted at the target locus. This method makes it possible to determine the genotype of each individual simply by observing the fluorescence later than F1 generation. [摘要] 该协议描述了使用两种不同颜色的荧光蛋白基因插入目标基因座的简单基因分型。这种方法可以简单地通过观察比F1代更晚的荧光来确定每个个体的基因型。

【背景】由于基因组编辑动物的常规基因分型在很大程度上取决于基于PCR的基因分型，所以有必要提取基因组DNA。在青aka中，尾鳍是一种易于再生的组织，因此经常用于基因分型以保持鱼的活力。要切断尾鳍，必须喂鱼几周，使其长得足够大（体长约1厘米）。喂养和照顾许多鱼费时费力。因此，希望减少繁殖早期如胚和早期幼虫的鱼的数量，以减少任务。然而，由于胚胎和幼虫的尾鳍太小而脆弱，因此很难将它们活下来。为了克服这个问题，基因分型的一个简单和非侵入性的方法是必不可少的。因此，我们开发了一种新的方法，只需通过观察荧光就可以无创地确定每个胚胎期的基因型。我们在基因敲入实验中证实了该方法的益处，该实验针对在受精后4天（dpf）（Murakami）在中枢神经系统（CNS）中表达的生长相关蛋白43（ gap43 et al 。，2017）。这个基因适用于基因敲入实验，因为在先前的研究中，已经通过RT-PCR和原位杂交揭示了其时空表达模式（Fujimori等，。，2008）。如果野生型靶基因的表达模式是未知的，则需要通过RT-PCR或任何其他技术来分析，以证实其与基因敲入菌株中报道基因的对应性。

产品评论

1mol/l-Tris-HCl Buffer Solution(pH 8.0)

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