| Cellulase and Macerozyme-PEG-mediated Transformation of Moss Protoplasts
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Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] This protocol describes the generation of protoplasts from protonemal tissue of the moss Physcomitrium patens (syn. Physcomitrella patens), using Cellulase ONOZUKA R10 and Macerozyme R10, followed by polyethylene glycol (PEG) mediated transformation. The protonemal tissue grown in liquid suspension was harvested and treated with enzyme cocktails mix of 1.5% Cellulase ONOZUKA R10 and 0.5% Macerozyme R10 to generate 1,8 million protoplasts within 3 h.
[摘要] [摘要]该方案描述从苔藓原丝体的原生质体组织的生成Physcomitrium藓（同义词小立碗藓），使用纤维素酶Onozuka R 10和离析酶R10，随后聚乙二醇（PEG）介导的转化。收获在液体悬浮液中生长的原质组织，并用1.5％Cellulase ONOZUKA R10和0.5％Macerozyme R10的酶混合物混合处理，在3小时内产生180万原生质体。
[背景]由于其在自然同源性定向修复中的效率，Physcomitrium patens非常适合用作植物实验系统，尤其是用于基因的异源表达，从而可以产生具有可预测特性和特征的转化体。此外，P.patens具有低成本培养的优势，并且可以在生物反应器中大量维护（Reski等人，2018）。的基因工程展叶剑叶藓细胞允许大规模生产天然产物和药物如的毒胡萝卜素和其它萜类的候选药物，这是很难的访问（西蒙森等人，2009） 。该协议显示了如何分离和转化从单倍体原生质丝释放的彭定康原生质体。P. patens已被用于原生质体的产生和PEG介导的转化。在之前的实验protoplastation上展叶剑叶藓中与酶进行崩溃酶从担子菌纲（湾。等2009，;巴赫等人，2014） ...
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| Real-time Analysis of Auxin Response, Cell Wall pH and Elongation in Arabidopsis thaliana Hypocotyls
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Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract] The rapid auxin-triggered growth of the Arabidopsis hypocotyls involves the nuclear TIR1/AFB-Aux/IAA signaling and is accompanied by acidification of the apoplast and cell walls (Fendrych et al., 2016). Here, we describe in detail the method for analysis of the elongation and the TIR1/AFB-Aux/IAA-dependent auxin response in hypocotyl segments as well as the determination of relative values of the cell wall pH.
[摘要] 拟南芥下胚轴的快速生长素触发的生长涉及核TIR1 / AFB-Aux / IAA信号传导并伴随质外体和细胞壁的酸化（Fendrych 等，2016）。 在这里，我们详细描述了在下胚轴节段中的延伸和TIR1 / AFB-Aux / IAA依赖性生长素响应的分析方法以及细胞壁pH的相对值的确定。
【背景】植物激素生长素诱导拟南芥下胚轴的快速生长。 这个过程需要TIR1 / AFB-Aux / IAA生长素共同受体。 生长素促进TIR1 / AFB和Aux / IAA的结合，导致后者的泛素化和降解，并导致生长素应答基因的转录。 这个协议的重点是测量拟南芥下胚轴的生长，生长素信号和细胞壁酸化。 该协议是基于以前Schenck等人的工作，2010年，Takahashi等人，2012年，Fraas 等人，2014年 和Spartz 等。，2014; 但与已发表的工作不同，我们描述了能够测量下胚轴生长期间发生的更大范围过程的程序; 从肉眼可见的器官伸长，通过共焦显微镜监测的细胞壁pH到通过荧光素酶生物发光显现的实时核生长素信号传导。
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