| Production of Phenotypically Uniform Human Cerebral Organoids from Pluripotent Stem Cells
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Author:
Date:
2021-04-20
[Abstract] Recent advances in stem cell technology have allowed researchers to generate 3D cerebral organoids (COs) from human pluripotent stem cells (hPSCs). Indeed, COs have provided an unprecedented opportunity to model the developing human brain in a 3D context, and in turn, are suitable for addressing complex neurological questions by leveraging advancements in genetic engineering, high resolution microscopy, and tissue transcriptomics. However, the use of this model is limited by substantial variations in the overall morphology and cellular composition of organoids derived from the same ...
[摘要] [摘要]在干细胞技术的最新进展已经使研究人员能够产生3D脑类器官由人多能干细胞（（COS）hPSCs ）。事实上，COS提供了一个前所未有的机会，发展人的大脑在3D场景模型，并反过来，适用于通过利用在进步，基因工程，高分辨率显微镜处理复杂的神经系统的问题，并组织转录。然而，在U SE 该模型的模型受到源自同一多能细胞系的类器官的整体形态和细胞组成的实质性变化的限制。为了解决这些限制，我们建立了坚固的，高-通过优化的初始阶段用于生产相一致的COS效率协议胚状体（EB）形成和神经诱导。使用该协议，采购员可以重复地与产生一个均匀的尺寸，形状，以及跨多个批次的细胞组合物。˚F urthermore，类器官的是发展了延长的时间段（3 - 6个月）显示建立的相对成熟的功能，包括电生理学活性的神经元，少突胶质细胞和祖细胞的产生。因此，该平台提供了可用于研究人脑发育和相关疾病的强大实验模型。
图形摘要：
多能干细胞对脑类器官发育的概述
[背景技术]在最新进展在体外从人多能干细胞（衍生3D脑类器官（COS）的发展hPSCs ...
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| Combined in situ Hybridization/Immunohistochemistry (ISH/IH) on Free-floating Vibratome Tissue Sections
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Author:
Date:
2014-09-20
[Abstract] In situ hybridization and immunostaining are common techniques for localizing gene expression, the mRNA and protein respectively, within tissues. Both techniques can be applied to tissue sections to achieve similar goals, but in some cases, it is necessary to use them together. For example, complement C1q is a secreted protein complex that can target the innate immune response during inflammation. Complement has been found to be elevated early and before severe neurodegeneration in several disease models. Thus, complement may serve as an important marker for disease progression and ...
[摘要] 原位杂交和免疫染色是分别定位组织内基因表达，mRNA和蛋白质的常用技术。两种技术可以应用于组织切片以实现类似的目标，但是在一些情况下，有必要一起使用它们。例如，补体C1q是可以靶向炎症期间的先天免疫应答的分泌的蛋白复合物。已经发现补体在几种疾病模型中早期升高和严重神经变性之前升高。因此，补体可以作为疾病进展的重要标志物，并且可能有助于在某些条件下的病理学。由于补体是分泌的复合物，C1q的免疫染色不一定揭示产生补偿的位置。补体成分，C1q a，b或c mRNA的原位杂交是理想的标记组织中产生补体的细胞。原位杂交可以与细胞类型特异性免疫染色偶联以准确鉴定所涉及的细胞类型。蛋白质定位和mRNA定位一起可以揭示关于疾病组织内补体产生和补体靶细胞之间的关系的细节。在这里我们概述在同一组织切片上的组合原位杂交和免疫染色的步骤。这里概述的协议已设计用于检测小鼠脑神经元和小胶质细胞中的补体C1q。
这里提供了两种组合ISH/IH的方法。在第一个实施例中，C1q mRNA的原位杂交与使用Calbindin-D28K抗体的Purkinje神经元细胞体的荧光检测一起进行。在第二个实施例中，使用CD68抗体与小胶质细胞的3,3'-二氨基联苯胺（DAB）一起进行C1q ...
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| Analysis of RNA-protein Interactions Using Electrophoretic Mobility Shift Assay (Gel Shift Assay)
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Author:
Date:
2013-11-20
[Abstract] RNA binding proteins (RBPs) play a crucial role in regulating gene expression at the post-transcriptional level at multiple steps including pre-mRNA splicing, polyadenylation, mRNA stability, mRNA localization and translation. RBPs regulate these processes primarily by binding to specific sequence elements in nascent or mature transcripts. There are several hundreds of RBPs in plants, but the targets of most of them are unknown. A variety of experimental methods have been developed to identify targets of an RBP. These include RNA immunoprecipitation (RIP), UV cross-linking and ...
[摘要] RNA结合蛋白（RBP）在包括前mRNA剪接，多聚腺苷酸化，mRNA稳定性，mRNA定位和翻译的多个步骤在调节转录后水平的基因表达中起关键作用。 RBP主要通过结合新生或成熟转录物中的特定序列元件来调节这些过程。植物中有几百个RBP，但其中大多数的目标是未知的。已经开发了各种实验方法来鉴定RBP的目标。这些包括RNA免疫沉淀（RIP），UV交联和免疫沉淀（CLIP）和CLIP的许多变体（例如PAR-CLIP，iCLIP）。这些方法取决于使用针对该RBP的抗体与特异性RBP结合的RNA的免疫沉淀。电泳迁移率变动分析（EMSA），也称为凝胶移位分析，已被用于分析蛋白质 - 核酸相互作用。它是一种简单而强大的方法来分析蛋白质-RNA/DNA相互作用。在RNA EMSA中，通过在蛋白质存在下比较RNA的迁移来可视化RNA-蛋白质复合物。通常，在RNA EMSA中，使用特异性RNA序列来分析其与蛋白质的相互作用。将具有荧光标记的体外转录的32 P标记的或化学合成的RNA与或不与目标蛋白一起温育，然后将反应混合物在天然聚丙烯酰胺凝胶电泳上运行。 RNA-蛋白复合物与游离RNA相比缓慢迁移，其可以使用成像系统可视化。除了测试RBP与RNA的结合之外，EMSA还用于绘制参与相互作用的RNA和/或蛋白质中的区域。此外，还可以使用EMSA定量结合亲和力。
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