Gene Expression and Genome Editing Systems by Direct Delivery of Macromolecules Into Rice Egg Cells and Zygotes
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] Polyethylene glycol calcium (PEG-Ca2+)-mediated transfection allows rapid and efficient examination to analyze diverse cellular functions of genes of interest. In plant cells, macromolecules, such as DNA, RNA and protein, are delivered into protoplasts derived from somatic tissues or calli via PEG-Ca2+ transfection. To broaden and develop the scope of investigations using plant gametes and zygotes, a procedure for direct delivery of macromolecules into these cells has recently been established using PEG-Ca2+ transfection. This PEG-Ca2+-mediated ...
[摘要] [摘要 ] P olyethylene乙二醇钙(PEG-的Ca 2+ )介导的转染允许快速和有效的检查来分析感兴趣的基因的不同的细胞功能。在植物细胞中,大分子,例如DNA,RNA和蛋白质,通过PEG-Ca 2+ 转染被传递到源自体组织或愈伤组织的原生质体中。牛逼Ø拓宽和开发利用植物的配子和合子,直接递送大分子进入这些细胞最近已经采用PEG-钙建立过程调查范围2+ 转染。这种PEG-Ca 2+ 介导的传递至水稻卵细胞/受精卵的过程包括四个 微技术,(i )配子的分离,(ii)通过配子的电融合产生合子,(iii)PEG-Ca 2+ 介导的大分子向分离的卵细胞或产生的合子的传递,以及(iv)的培养和随后的分析转染的卵细胞/受精卵。因为对于完整的协议microtechniques (我)和(ii)已在户报告等人。,2016年,microtechniques (iii)和(iv)的主要是在第描述是协议。
[背景 ] 在被子植物中,受精和随后的发育事件,诸如胚胎发生和胚乳发育,发生在深深嵌入卵形组织胚囊(Nawaschin ,1898; Guignard ,1899;罗素,1992;拉加,2003) ...
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Mouse Phrenic Nerve Hemidiaphragm Assay (MPN)
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] The neuromuscular junction (NMJ) is the specialized synapse by which peripheral motor neurons innervate muscle fibers and control skeletal muscle contraction. The NMJ is the target of several xenobiotics, including chemicals, plant, animal and bacterial toxins, as well as of autoantibodies raised against NMJ antigens. Depending on their biochemical nature, the site they target (either the nerve or the muscle) and their mechanism of action, substances affecting NMJ produce very specific alterations of neuromuscular functionality.
Here we provide a detailed protocol to isolate the ...
[摘要] 神经肌肉接头(NMJ)是外周运动神经元支配肌纤维和控制骨骼肌收缩的特化突触。 NMJ是几种异生素的靶标,包括化学品,植物,动物和细菌毒素,以及针对NMJ抗原产生的自身抗体。根据它们的生物化学性质,它们靶向的部位(神经或肌肉)及其作用机制,影响NMJ的物质产生神经肌肉功能的非常特定的改变。
在这里,我们提供了一个详细的协议来隔离小鼠的膈肌,并建立两个自主神经支配的半膈。这种制剂可用于研究生物活性物质,如毒素,毒液和各种起源的神经活性分子,或测量骨骼肌收缩力。
“小鼠膈神经半膈膜测定法”(MPN)是一种建立的离体NMJ模型,并概括了容易控制和操纵的系统中神经肌肉传导的复杂性,因此代表了一种有价值的研究工具NMJ生理学和毒素和其他分子作用于该突触的作用机制。
【背景】神经肌肉接头(NMJ)是使运动神经元和骨骼肌纤维之间能够交流的化学突触。这是最好的特征性突触,关于突触的成熟,结构和功能的大部分知识来源于其研究(Li等人,2017)。在NMJ,沿着运动轴突运动的动作电位侵入神经末梢(突触前布顿)并诱导突触小泡与突触前膜融合。这触发乙酰胆碱(ACh)的释放,该乙酰胆碱是结合突触后肌肉纤维上的烟碱离子型ACh受体(nAChR)的神经递质。 ACh与nAChRs结合后,突触后动作电位沿着肌纤维向外扩散,从肌浆网释放Ca2 ...
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Medaka-microinjection with an Upright Microscope
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Date:
2018-02-05
[Abstract] We described a simple method for microinjecting DNA/RNA/Protein solutions into medaka eggs under an upright microscope. Medaka is an excellent vertebrate model for reverse genetics, because of its daily spawning, short generation time, and egg transparency. These features enable us to efficiently perform functional genomic analyses of transgenic or genome edited fish. This protocol contains the initial steps necessary to create various types of genetically modified fish.
[摘要] 我们已经描述了在直立显微镜下将DNA / RNA /蛋白质溶液显微注射到青eggs蛋中的简单方法。 青aka是一种优秀的反向遗传学脊椎动物模型,因为其每日产卵,短代时间和卵子透明度。 这些特征使我们能够有效地进行转基因或基因组编辑的鱼的功能基因组分析。 该协议包含了创建各种转基因鱼所需的初始步骤。
【背景】青aka是一种小型的淡水硬骨鱼物种,具有脊椎动物模型的特征,包括每日产卵,完整的基因组序列和一些有用菌株的可用性。此外,其蛋的透明度是通过显微注射将DNA / RNA /蛋白质溶液精确地引入蛋的细胞质中。显微注射对于功能基因组分析是重要的;例如,DNA显微注射是产生转基因鱼的不可缺少的技术,并且有助于理解体内基因的功能(Ozato等人,1986)。此外,CRISPR / Cas系统的显微注射能够实现靶向基因组编辑,如敲除和敲入方法(Ansai和Kinoshita,2014,Murakami等人,2017a)。
立体显微镜和直立显微镜均可用于鱼胚胎显微注射。虽然直立显微镜的显微注射正处于不稳定的状态。在本文中,我们描述了一个直立显微镜显微注射法的轮廓。该方法可以与其他方案一起使用,例如用于产生基因敲除或基因敲入系的方案(Ansai和Kinoshita,2014,Murakami等人,2017b)。
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