| An in vitro DNA Sensor-based Assay to Measure Receptor-specific Adhesion Forces of Eukaryotic Cells and Pathogens
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Author:
Date:
2020-09-05
[Abstract] Motility of eukaryotic cells or pathogens within tissues is mediated by the turnover of specific interactions with other cells or with the extracellular matrix. Biophysical characterization of these ligand-receptor adhesions helps to unravel the molecular mechanisms driving migration. Traction force microscopy or optical tweezers are typically used to measure the cellular forces exerted by cells on a substrate. However, the spatial resolution of traction force microscopy is limited to ~2 µm and performing experiments with optical traps is very time-consuming.
Here we present the ...
[摘要] [摘要 ] 组织内真核细胞或病原体的运动性是通过与其他细胞或细胞外基质特异性相互作用的转换来介导的。这些配体-受体粘附的生物物理特征有助于揭示驱动迁移的分子机制。牵引力显微镜或光学镊子通常用于测量细胞在基质上施加的细胞力。但是，牵引力显微镜的空间分辨率仅限于〜2 µm，使用光阱进行实验非常耗时。
在这里，我们介绍了仿生表面的生产，该表面能够通过合成配体实现特定的细胞粘附，同时通过使用分子张力传感器监控传递的力。将配体与双链DNA探针偶联，该探针具有确定的DNA解链力阈值。从而将pN范围内的受体介导力半定量转换为荧光信号，可以通过标准荧光显微镜在分辨率极限（〜0.2 µm）上检测到。
该测定的模块化设计允许改变所呈现的配体和DNA探针的机械强度，这为探测不同的真核细胞类型和病原体的粘附提供了多种可能性，此处以骨肉瘤细胞和伯氏疟原虫子孢子体为例。
[背景 ] 运动细胞和病原体以多种不同方式与环境相互作用（Parsons 等，2010； Nan ，2017； Muthinja 等，2018 ）。例如，跨膜受体将单个细胞锚定在其环境中，并使其与其他细胞相互作用（Hynes ，1992）。整联蛋白是将细胞连接到细胞外基质的主要受体，它以双向方式传递力（Schoen et ...
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| Radioactive Tracer Feeding Experiments and Product Analysis to Determine the Biosynthetic Capability of Comfrey (Symphytum officinale) Leaves for Pyrrolizidine Alkaloids
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] This protocol delivers a method to determine the biosynthetic capability of comfrey leaves for pyrrolizidine alkaloids independently from other organs like roots or flowers.
The protocol applies and combines radioactive tracer experiments with standard and modern techniques like thin layer chromatography (TLC), solid-phase extraction (SPE), high-performance liquid chromatography (HPLC) and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS).
[摘要] 该协议提供了一种方法来确定紫草叶生物合成能力的吡咯烷生物碱独立于其他器官，如根或花。
该协议将放射性示踪剂实验与薄层色谱法，固相萃取法，高效液相色谱法和气相色谱 - 质谱法等标准和现代技术相结合。
【背景】据了解，紫草根能够合成吡咯里西啶生物碱（Frölichet al。，2007），生物合成的关键酶高胡亚素合成酶（HSS）定位于内皮细胞。 除了这个合成位点之外，还有一些暗示，即某个发育阶段的叶子也许能够产生吡咯里西啶生物碱（Niemüller等人，2012）。 因此，开发一种方案来确定紫草叶合成吡咯里西啶生物碱的生物合成能力，以独立于其他植物器官。
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