| Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells (hiPSCs) into Osteoclasts
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Author:
Date:
2020-12-20
[Abstract] Defects in bone resorption by osteoclasts result in numerous rare genetic bone disorders as well as in some common diseases such as osteoporosis or osteopetrosis. The use of hiPSC-differentiated osteoclasts opens new avenues in this research field by providing an unlimited cell source and overcoming obstacles such as unavailability of human specimens and suitable animal models. Generation of hiPSCs is well established but efficient differentiation of hiPSCs into osteoclasts has been challenging. Published hiPSC-osteoclast differentiation protocols use a hiPSC-OP9 co-culture system or ...
[摘要] [摘要]破骨细胞引起的骨吸收缺陷导致许多罕见的遗传性骨疾病以及某些常见的疾病，例如骨质疏松症或骨质疏松症。采用的hiPSC -分化破骨细胞通过提供无限的细胞来源和克服障碍，如人体标本和合适的动物模型的可用性打开了该领域的新途径。hiPSC的生成已被公认，但是将hiPSC高效分化为破骨细胞一直具有挑战性。发布的hiPSC -osteoclast分化协议使用的hiPSC-OP9共培养体系或hiPSC细胞来源的胚状 具有多种细胞因子的机体（EB）。我们的三阶段协议包含：1）中胚层EB分化，2）的扩张骨髓单核细胞和3）的成熟的hiPSC -osteoclasts。我们通过在Nunclon Sphera微孔板上培养Accutase分离的hiPSCs来产生大小均一的EB，并在4天的细胞因子混合物中促进EB中胚层分化。对于第2阶段，将EBs转移至明胶包被的平板中，并用hM -CSF和hIL-3培养，以扩增骨髓单核细胞群。通过与维生素d，补充hTGF β，HM -CSF和hRANKL ，在第2阶段结束时收集的细胞的diff erentiated成成熟破骨细胞（第3阶段）。与其他技术相比，我们的协议不需要共培养系统。诱导EBs分化为中胚层 均匀的方式; 使用较少的细胞因子进行分化；只需要很短的时间就可以使破骨细胞成熟，并产生足够数量的破骨细胞用于后续的分子分析。
图形摘要： ...
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| Measurement of Oxygen Consumption Rate (OCR) and Extracellular Acidification Rate (ECAR) in Culture Cells for Assessment of the Energy Metabolism
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Mammalian cells generate ATP by mitochondrial (oxidative phosphorylation) and non-mitochondrial (glycolysis) metabolism. Cancer cells are known to reprogram their metabolism using different strategies to meet energetic and anabolic needs (Koppenol et al., 2011; Zheng, 2012). Additionally, each cancer tissue has its own individual metabolic features. Mitochondria not only play a key role in energy metabolism but also in cell cycle regulation of cells. Therefore, mitochondria have emerged as a potential target for anticancer therapy since they are structurally and functionally ...
[摘要] 哺乳动物细胞通过线粒体（氧化磷酸化）和非线粒体（糖酵解）代谢产生ATP。已知癌细胞使用不同的策略重新编程它们的代谢以满足能量和合成代谢需要（Koppenol等人，2011; Zheng，2012）。此外，每个癌症组织都有其自己的个体代谢特征。线粒体不仅在能量代谢中起关键作用，而且在细胞的细胞周期调控中也起关键作用。因此，线粒体作为抗癌治疗的潜在靶标已经出现，因为它们在结构和功能上与其非癌对应物不同（D'Souza等人，2011）。我们详细介绍了利用海马XF24细胞外通量分析仪（图1）测量活细胞中氧耗率（OCR）和细胞外酸化率（ECAR）测量的方案。 Seahorse XF24细胞外通量分析仪持续测量细胞上清液中的氧浓度和质子流量（Wu等人，2007）。这些测量结果在OCR和ECAR值中转换，并能够直接定量线粒体呼吸和糖酵解。有了这个协议，我们试图评估三种不同癌细胞系的基线粒体功能和线粒体应激反应细胞毒性测试先导化合物甲磺卡西林，以研究其作用机制。将细胞铺在XF24细胞培养板中并保持24小时。在分析之前，将培养基替换为无缓冲的DMEM pH7.4，然后使细胞在非代谢通量分析前使用Seahorse XF在非CO 2孵育器中平衡以允许精确测量Milli-pH单位改变。 ...
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| Immunoprecipitation of Tri-methylated Capped RNA
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] Cellular quiescence (also known as G0 arrest) is characterized by reduced DNA replication, increased autophagy, and increased expression of cyclin-dependent kinase p27Kip1. Quiescence is essential for wound healing, organ regeneration, and preventing neoplasia. Previous findings indicate that microRNAs (miRNAs) play an important role in regulating cellular quiescence. Our recent publication demonstrated the existence of an alternative miRNA biogenesis pathway in primary human foreskin fibroblast (HFF) cells during quiescence. Indeed, we have identified a group of ...
[摘要] 蜂窝静止（因此已知为G <子> 0 骤停）是由降低的DNA复制，增加自噬表征，并且增加的细胞周期蛋白依赖性激酶p27蛋白上标kip1 表达。静止对伤口愈合，器官再生和瘤形成是必不可少的。先前的发现表明微小RNA（miRNA）在调节细胞静止过程中起重要作用。我们最近的出版物静止期间以实例阐述在原代人替代miRNA生物途径包皮成纤维（HFF）细胞的存在。实际上，我们已经发现了一组与由trimethylguanosine合酶1（TGS1）蛋白的2,2,7- trimethylguanosine（TMG）带肩改性PRI-的miRNA（其成熟miRNA发现静止期期间诱导的）的并运输到细胞质通过Exportin-1（XPO1）蛋白质。我们用来抗体针对（TMG）兴趣盖（不与第（m交叉反应 7 G）兴趣帽了大部分PRI-的miRNA或mRNA的含有[鲁曼等人的，1982]），以从增殖或静态HFFS的总RNA提取RNA进行免疫沉淀。该测定的新颖性是PRI-miRNA的以及含有一个TMG-帽修改以外的非编码RNA的特异性分离。
【背景】蜂窝静止，类型可逆生长停滞的，是在伤口愈合，器官再生，和预防瘤形成涉及一种重要的细胞状态（科勒，2011;瓦尔古等人 2012）。已发现小的非编码RNA如miRNA参与细胞静止的调节。 ...
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