| Ex vivo Follicle Rupture and in situ Zymography in Drosophila
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Ovulation, the process of releasing a mature oocyte from the ovary, is crucial for animal reproduction. In order for the process of ovulation to occur, a follicle must be fully matured and signaled to rupture from the ovary. During follicle rupture in both mammals and Drosophila, somatic follicle cells are enzymatically degraded to allow the oocyte to be liberated from the follicle. Here, we describe a detailed protocol of our newly developed ex vivo follicle rupture assay in Drosophila, which represents a first assay allowing direct quantification of follicles’ ...
[摘要] 排卵是从卵巢释放成熟卵母细胞的过程，对动物繁殖至关重要。 为了发生排卵过程，卵泡必须完全成熟并发信号通知卵巢破裂。 在哺乳动物和果蝇卵泡破裂期间，体细胞卵泡细胞被酶促降解以允许卵母细胞从卵泡释放。 在此，我们描述了我们在果蝇中新开发的离体卵泡破裂测定的详细方案，其代表允许直接量化卵泡响应排卵刺激的能力的第一测定 并破裂。 可以修改该测定以刺激用其他试剂（例如离子霉素）破裂或查询酶活性（原位酶谱法）。 此外，这种检测方法允许基因或药理学筛选鉴定果蝇中调节卵泡破裂的基因或小分子。
【背景】由于在直接显示和定量排卵事件方面的技术挑战，对果蝇中的排卵的研究在很大程度上受到限制。在过去的几十年中，多种间接方法已经有了局限性。研究果蝇排卵的第一种方法是推动女性的腹部，并记录是否有卵子从产卵器排出（Aigaki et al。，1991; Lee <等人，2003）。这种方法是粗略估计子宫内是否有排卵的卵子。第二种常见的测定方法是测量雌蝇交配后的产蛋能力。产卵过程复杂，涉及卵泡的发育和成熟，排卵，排卵通过输卵管的运输，选择合适的产卵基质和产卵（spradling，1993; bloch="" qazi等人。，2003）。如果这些过程中的任何一个受到损害，则会导致产蛋率有缺陷。排卵受损的另一个指标是卵子保留表型（monastirioti等人，1996;="" monastirioti，2003;="" cole等人，2005）。如果女性卵巢内有过多的成熟卵泡，则表示无排卵表型。然而，这可以直接由排卵缺陷引起，或间接由产卵过程中排卵下游的缺陷引起。另一方面，缺乏保留表型并不一定意味着缺乏排卵缺陷。用于研究排卵的第四种测定方法是检查生殖道中是否存在卵子（heifetz="" et="" al。2000，lee="" et="" al。2009;="" lim="" 等人，，2014）。该测定法中的变化范围从量化排卵率的比例通过雌性在其下部输卵管/常见输卵管/子宫交配后的雌性百分比来定量（lee等人，2009;="" lim等人，="" ，2014年），以检查这些分开的区域随着时间的推移而分布的鸡蛋（heifetz="" et="" al。="" 2000="">）。然而，这些测定中的每一个都可能受卵子发生，排卵和产卵速度的影响。为了说明每个单独测定的所有可能的缺点，我们最近将雌性生殖道中的卵子保留测定，产蛋测定和卵子定位结合起来以估计卵子排卵的平均时间（排卵时间; Sun和Spradling，2013年; Deady et al。，2015年和2017年; Deady和Sun，2015年; ...
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| Registration and Alignment Between in vivo Functional and Cytoarchitectonic Maps of Mouse Visual Cortex
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Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] This protocol describes a method for registration of in vivo cortical retinotopic map with cytochrome c oxidase (CO) labeled architectonic maps of the same mouse brain through the alignment of vascular fiducials. By recording surface blood vessel pattern and sequential alignment at each step, this method overcomes the challenge imposed by tissue distortion during perfusion, mounting, sectioning and histology procedures. This method can also be generalized to register and align other types of in vivo functional maps like ocular dominance map and spatial/temporal frequency ...
[摘要] 该协议描述了通过血管基准点的对齐使用细胞色素c氧化酶（CO）标记的相同小鼠脑的构建图来注册体内皮质视网膜地图的方法。 通过记录每个步骤的表面血管图案和顺序对准，该方法克服了在灌注，贴壁，切片和组织学程序期间由组织变形所施加的挑战。 这种方法也可以推广到注册和对齐其他类型的体内功能地图，如眼优势地图和空间/时间频率调整地图与小鼠皮层的各种解剖图。
【背景】通过体内视网膜映射（Marshel等人，2011; Garrett等人，），可以将小鼠视觉皮层分隔成功能上不同的视觉区域。 （Olavarria and Montero，1989; Wang and Burkhalter，2007），或者通过建筑结构辅助的神经元追踪技术，这些不同的视觉区域具有不同的响应特性和皮质皮质连接（Andermann等人，2011; Marshel等人，2011; Roth等人， >，2012; Wang等人，2011和2012）。这些结果表明，鼠标视觉区域形成处理不同类型的视觉信息的分离的视觉流（Murakami等人，2017; Smith等人，2017）。在视觉区域地图的背景下研究鼠标视觉系统对于理解视觉皮层的组织是至关重要的。然而，虽然功能图和结构图大致相似，但是这两幅图显示的并不完美（Zhuang et ...
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