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Date:
2020-04-05
[Abstract] Ascidians are the closest living relatives of vertebrates (Delsuc et al., 2006; Satoh et al., 2014) and are important for the evolutionary study of the ovarian follicle development including oocyte maturation and ovulation. However, neither the endogenous factors nor the molecular mechanisms underlying the oocyte maturation and ovulation had been elucidated mainly due to the lack of efficient procedure for isolating ovarian follicles. Here, we present the protocol for the effective fractionation and isolation of the ovarian follicle of Ciona intestinalis type A ...
[摘要] [摘要 ] 海鞘是脊椎动物的近亲（Delsuc 等，2006； Satoh 等，2014），对于卵巢卵泡发育（包括卵母细胞成熟和排卵）的进化研究具有重要意义。然而，尚未阐明卵母细胞成熟和排卵的内源性因素或分子机制，主要是由于缺乏有效的分离卵泡的程序。在这里，我们介绍了使用不同粒径的不锈钢筛网有效分离和分离A型Ciona 小肠卵巢卵泡的方案，以及Ciona 的简单孵育方法 卵泡用于评估卵母细胞的成熟和排卵。结合每个部分的RNA-seq数据，当前的方法使我们以特定阶段的方式研究包括卵母细胞成熟和排卵在内的卵巢卵泡发育。
[背景 ] Ciona 卵巢卵泡分为四个主要发育阶段：I期（卵黄形成前），II期（卵黄形成），III期（卵黄形成后，GVBD之前）和IV期（GVBD后，排卵）卵泡。 （图1；Prodon 等，2006； Silvestre 等，2009）。成年海鞘的卵巢在整个发育阶段都包含许多卵泡，因此，在特定阶段分离单个卵泡既费时又麻烦。这阻碍了卵泡发育的功能分析，并提示需要有效的卵泡分离方法。在这里，我们提供一种有效的分离方法，每一个developmenta的混合物卵泡的升级可以使用一系列的分馏不锈钢筛具有各种粒度目ES （20-150 μ 米）。当前的分级方法使我们能够轻松快速地分离出卵泡的整个发育阶段。此外，卵母细胞的成熟和排卵可以分别通过生发小泡b ...
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