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Date:
2018-03-05
[Abstract] Disease-associated mutations influencing mRNA splicing are referred to as splice mutations. The majority of splice mutations are found on exon-intron boundaries defining canonical donor and acceptor splice sites. However, mutations in the coding region (exonic mutations) can also affect mRNA splicing. Exact knowledge of the disease mechanism of splice mutations is essential for developing optimal treatment strategies. Given the large number of disease-associated mutations thus far identified, there is an unmet need for methods to systematically analyze the effects of pathogenic mutations on ...
[摘要] 影响mRNA剪接的疾病相关突变称为剪接突变。大多数剪接突变位于确定典型供体和受体剪接位点的外显子 - 内含子边界上。然而，编码区中的突变（外显子突变）也可影响mRNA剪接。准确了解剪接突变的疾病机制对于开发最佳治疗策略至关重要。鉴于迄今为止鉴定的大量疾病相关突变，尚未满足对系统分析致病突变对mRNA剪接的影响的方法的需求。由于不同细胞类型之间的拼接可能不同，如果可能的话，拼接突变需要在天然条件下进行测试。一种常用的分析mRNA剪接的工具是携带外显子和内含子序列的小基因的构建。在这里，我们描述了设计和克隆到重组腺相关病毒（rAAV）载体中用于基因递送和在本地环境中调查mRNA剪接的方案。该协议是为了基于小基因的视网膜细胞中mRNA剪接分析而开发的，但是原则上它适用于任何可以用rAAV载体转导的细胞类型。
【背景】预计大部分疾病相关突变（至少15％）会导致异常的mRNA剪接（Cartegni等，2002; Singh和Cooper，2012; Sterne-Weiler和Sanford，2014年）。 '经典'剪接突变是影响定义5'和3'剪接位点（分别为供体和受体剪接位点）的规范序列的突变。然而，剪接突变也可能发生在其他非编码区和编码区（Wang和Cooper，2007; ...
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