| Detection of Cell Death in Planarians
|
|
Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract] Planarians are freshwater flatworms, well known for their ability to regenerate a complete organism from any piece of their body. Furthermore, planarians are constantly growing and degrowing throughout their lives, maintaining a functional and proportioned body. These properties rely on the presence of a population of adult stem cells and on the tight control of their cell renewal, which is based on the balance between the proliferation of new cells and their differentiation, and the death of unnecessary cells. Due to the importance of these two processes in planarian biology, over the years, ...
[摘要] 涡虫是淡水扁虫，因其能够从身体的任何部分再生完整的有机体而闻名。 此外，涡虫在其一生中不断生长和去除，保持功能和比例的身体。 这些特性依赖于成体干细胞群的存在以及对细胞更新的严格控制，其基于新细胞增殖与其分化之间的平衡以及不必要细胞的死亡。 由于这两个过程在涡虫生物学中的重要性，多年来，研究人员已经优化了分子技术，以检测涡虫中的细胞增殖和细胞死亡。 在这里，我们提出了目前用于细胞死亡检测和量化的两种主要方案：Caspase-3活性定量和TUNEL分析。
【背景】成体生物体中的细胞更新是基于三个过程的复杂机制：（a）通过细胞死亡消除选定的细胞; （b）通过细胞分裂取代已消除的细胞，通常涉及成体干细胞及其后代; （c）新生细胞的分化及其与先前存在的组织的整合（Pellettieri和Sanchez ...
|
|
|
| Zebrafish Embryo Xenograft and Metastasis Assay
|
|
Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] Xenograft models, and in particular the mouse xenograft model, where human cancer cells are transplanted into immunocompromised mice, have been used extensively in cancer studies. Although these models have contributed enormously to our understanding of cancer biology, the zebrafish xenograft model offers several advantages over the mouse model. Zebrafish embryos can be easily cultured in large quantities, are small and easy to handle, making it possible to use a high number of embryos for each experimental condition. Young embryos lack an efficient immune system. Therefore the injected ...
[摘要] 异种移植模型，特别是小鼠异种移植模型，其中人癌细胞被移植到免疫受损小鼠中，已广泛用于癌症研究。尽管这些模型对我们对癌症生物学的理解做出了巨大贡献，但斑马鱼异种移植模型与鼠标模型相比具有多种优势。斑马鱼胚胎可以很容易地大量培养，体积小且易于处理，因此可以在每种实验条件下使用大量胚胎。年轻的胚胎缺乏有效的免疫系统。因此，注射的癌细胞不被排斥，并且原发性肿瘤和微转移的形成是快速的。胚胎的透明度使得能够在完整和活的胚胎中对原发性肿瘤和转移瘤进行成像。在这里，我们描述了一种方法，其中表达GFP的肿瘤细胞被注射到斑马鱼胚胎的心包空间。在注射后4天，对胚胎成像并分析原发性肿瘤和远端微转移的形成。
【背景】 斑马鱼（ Danio rerio ）是一种小型淡水鱼，不仅在发育生物学中，而且在生物医学中越来越受欢迎。快速发展的领域之一是使用斑马鱼作为癌症生物学研究的模型。斑马鱼高效可靠地交配，可以产生大量小，透明，外部发育的后代，可以在例如，多孔板中轻松培养（White et al。 >，2013）。有趣的是，人类肿瘤细胞可以植入斑马鱼胚胎中，许多异种移植物能够通过在胚胎中生长，侵入和转移来忠实地重演它们的恶性行为（Lee et al。，2005; Nicoli et al。，2007; Chapman et ...
|
|
|
| Histone Deubiquitination Assay in Nicotiana benthamiana
|
|
Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Histone modifications are a group of post-translational modifications on histones which can alter chromatin structure and affect gene expression. Histone ubiquitination is a histone modification found in particular on histone H2A and H2B. Histone ubiquitination can be reversed by ubiquitin-specific proteases (UBP). Here, we describe an in vivo assay for histone deubiquitination activity. After infiltrating UBP12 into Nicotiana benthamiana leaves, H2Aub was visualized by immunocytochemistry. Nicotiana benthamiana leaves, which show high agro infiltration efficiency, ...
[摘要] 组蛋白修饰是一组组蛋白翻译后修饰，可以改变染色质结构并影响基因表达。组蛋白泛素化是组蛋白H2A和H2B特异性发现的组蛋白修饰。泛素特异性蛋白酶（UBP）可以逆转组蛋白泛素化。在这里，我们描述了组蛋白去泛素化活性的体内试验。在将UBP12渗入烟草叶片中后，通过免疫细胞化学观察H2Aub。表现出高的农业渗透效率的本氏烟草叶用于瞬时UBP12表达，用于节省劳力和时间的方案。 H2Aub水平降低表明UBP12的组蛋白去泛素化活性。 N的核的清晰可视化。本生叶使得该方法能够通过使用特异性抗体容易地测量体内组蛋白修饰的水平，从而提供强大的蛋白质功能线索。因此，该协议是组蛋白去泛素化活性的体外试验的有力补充。
【背景】组蛋白修饰在调节染色质结构和基因表达中发挥重要作用。 研究最深入的组蛋白修饰包括甲基化，乙酰化，磷酸化，泛素化和sumoylation。 然而，引入或去除特定组蛋白修饰的酶并不总是已知的。 强大的体外试验可以确定组蛋白修饰酶的催化潜能，但是体内试验方法对于确认体外试验的特异性反映抗体的特异性是必要的。 体内活动。 在这里，我们描述了一个灵活的协议来测试植物组织中组蛋白修饰酶的活性。本塞姆氏。 尽管我们使用该方案来测试遍在蛋白特异性蛋白酶（UBP）对泛素化H2A的活性，但它也可以容易地用于其他特异性抗体可用的组蛋白修饰。
|
|
|