| Purification of Rice Stripe Virus
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Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] Although many spherical and rod-shaped plant virus purification protocols are now available, only a few protocols on filamentous plant virus purification have been published. Here, we report a protocol for large-scale purification of Rice stripe virus (RSV) from RSV-infected rice tissues. RSV virions with high infectivity were first precipitated with polyethylene glycol (PEG) followed by pelleting through primary ultracentrifugation, ultracentrifugation in a glycerol cushion and ultracentrifugation in density gradient. The purified RSV virions can not only be viewed as filamentous particles ...
[摘要] [摘要 ] 尽管现在可以使用许多球形和杆状植物病毒的纯化方案，但有关丝状植物病毒纯化的协议却只有少数。在这里，我们提出一个协议水稻的大规模纯化小号牛肚v IRUS 从RSV感染的水稻组织（RSV）。首先用聚乙二醇（PEG）沉淀具有高感染力的RSV 病毒颗粒，然后通过一次超速离心，在甘油垫层中超速离心和密度梯度超速离心沉淀。纯化的RSV 病毒体不仅可以在电子显微镜下观察为丝状颗粒，而且还可以通过昆虫载体直接注入昆虫体内或在送入水稻之前通过膜饲喂获得。
[背景 ] 许多purificatio n，用于球形和棒状病毒协议已被发表（安德烈é 等人，2002; BALKE 。等人，2018） 。这些协议都依赖于化学沉淀或密度梯度离心。但是，丝状病毒的纯化方案目前受到限制。
大米小号肚v 病毒属（RSV）是负链RNA病毒，属于属纤细病毒，订单Bunyavirales 。在许多东亚国家，RSV经常对水稻生产造成严重损害（Whitfield 等，2015； Liu 等，2018）。与生产球状和包膜病毒体的Bunyavirales 顺序中的其他成员不同，RSV 病毒体是丝状的。然而，RSV基因组编码在纯化的RSV 病毒体中未发现的糖蛋白（Toriyama，19 86； Lu 等人，2019）。已知RSV ...
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| Alphavirus Purification Using Low-speed Spin Centrifugation
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Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] Chemical and sedimentation procedures are used to purify virus particles. While these approaches are successful for wild-type viruses, they are often not feasible for purifying mutant viruses with assembly defects. We combined two published methods (Atasheva et al., 2013; Moller-Tank et al., 2013), to generate a protocol that uses low-speed centrifugation to purify both wildtype and mutant enveloped virus particles at high yield with minimal handling steps. This protocol has successfully been used to purify alphavirus particles for imaging and structural studies (Wang et al. ...
[摘要] 化学和沉淀过程用于纯化病毒颗粒。 虽然这些方法对于野生型病毒是成功的，但它们通常不能用于纯化具有装配缺陷的突变病毒。 我们结合了两种公开的方法（Atasheva等人，2013; Moller-Tank等人，2013），以生成使用低速离心纯化两种方法的方案 野生型和突变体包膜病毒颗粒，产量高，处理步骤最少。 该方案已成功用于纯化甲病毒颗粒用于成像和结构研究（Wang等人，2015; Ramsey等人，2017）。
【背景】传统上，病毒纯化基于化学沉淀（例如PEG）或密度梯度离心。离心方案包括以高速（>100,000μgx g）或通过沉淀基质如铯，Nycodenz，碘克沙醇，蔗糖，甘油或酒石酸丸粒化颗粒。在梯度沉降之后，纯化的病毒样品通常需要额外的步骤来除去梯度基质，浓缩纯化的颗粒，并且缓冲液交换成用于下游应用的稳定缓冲液。这些方法包括透析，通过离心过滤器离心或PEG沉淀。虽然这些方法会产生纯化的颗粒，但有几个缺点：（1）总产量可能很低，（2）纯化所需的时间可能延长到一周，（3）形态上不均匀的颗粒不能以相同的效率纯化，（ 4）过程中可能会损坏颗粒，以及（5）组装突变体常常不能在净化过程中存活，使得某些下游分析具有挑战性。
这里描述的协议使用温和的方法来净化包膜病毒颗粒。我们使用最小的离心力来减少对粒子的损伤，这是由于负染透射电子显微镜（TEM）中增加的形态异质性或通过TEM或传染性测定法测定的易碎粒子的全部损失而观察到的。另外，我们希望减少纯化后纯化病毒体的操作。通过合并文献中的两个方案（Atasheva等人，2013; ...
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