Candida albicans Agar Invasion Assays
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Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] The ability of the human fungal pathogen Candida albicans to disseminate into tissues is promoted by a switch from budding to invasive hyphal growth. This morphological transition is stimulated by multiple environmental factors that can vary at different sites of infection. To identify genes that promote invasive growth, C. albicans mutants can be screened for defects in growing invasively into solid agar medium as a substitute for studying tissue invasion. This in vitro approach has advantages in that it permits the media conditions to be varied to mimic different ...
[摘要] [摘要 ] 人类真菌病原体白色念珠菌传播到组织的能力是由从发芽到侵入性菌丝生长的转换而增强的。多种环境因素可能会刺激这种形态转变,这些环境因素可能在不同的感染部位有所不同。为了鉴定促进侵入growt基因小时,白色念珠菌突变体可以在侵入性生长成固体琼脂培养基作为研究组织侵袭的替代品进行筛选的缺陷。这个体外 该方法的优点在于,它允许改变媒体条件以模仿不同的主机环境。另外,可以改变琼脂的浓度以确定改变细胞侵袭的基质的刚度的作用,因为与液体培养中形成菌丝的能力相比,这提供了更好的侵袭性生长指标。在多种条件下的测试可以用来鉴定具有最强缺陷的突变细胞。因此,将描述用于分析白色念珠菌在不同条件下的侵袭性生长的方案和培养基,其适合于测试突变株白色念珠菌菌株的单个菌株或高通量分析。
[背景 ] 白色念珠菌是一种多形性真菌病原体,可以通过形成芽(小球形细胞),假菌丝细胞(细长细胞链)或菌丝细胞(具有平行平行线的长丝状细胞链)生长(图1)(贵族等人,2017)。已证明宿主中遇到的多种环境刺激可促进向侵袭性生长的转变,包括人体温度(37 °C ),碱性pH,CO 2 ,血清中的因子和糖GlcNAc(N-乙酰氨基葡萄糖) )(Kornitzer,2019)。萌芽细胞被认为促进胃肠道的血流传播和定植(Pierce和Kumamoto ,2012 ;Witchley ...
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Design of Hybrid RNA Polymerase III Promoters for Efficient CRISPR-Cas9 Function
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Date:
2018-03-20
[Abstract] The discovery of the CRISPR-Cas9 system from Streptococcus pyogenes has allowed the development of genome engineering tools in a variety of organisms. A frequent limitation in CRISPR-Cas9 function is adequate expression levels of sgRNA. This protocol provides a strategy to construct hybrid RNA polymerase III (Pol III) promoters that facilitate high expression of sgRNA and improved CRISPR-Cas9 function. We provide selection criteria of Pol III promoters, efficient promoter construction methods, and a sample screening technique to test the efficiency of the hybrid promoters. A hybrid ...
[摘要] 来自化脓性链球菌的CRISPR-Cas9系统的发现使得在各种生物体中开发基因组工程工具成为可能。 CRISPR-Cas9功能的频繁限制是足够的sgRNA表达水平。 该协议提供了构建杂合RNA聚合酶III(Pol III)启动子的策略,其促进sgRNA的高表达和改善的CRISPR-Cas9功能。 我们提供Pol III启动子的选择标准,有效的启动子构建方法以及样品筛选技术来检测杂合启动子的效率。 为解脂耶氏酵母开发的杂交启动子系统将用作模型。
【背景】CRISPR(成簇定期间隔短回文重复序列)是细菌中发现的DNA序列的集合,其中含有先前曝光的病毒DNA片段(Marraffini和Sontheimer,2010)。片段被称为间隔区DNA,并且它们侧面是短的,重复的回文序列。细菌使用这些存储的间隔序列作为模板来表达RNA,以识别和攻击再次暴露的特定病毒。当与CRISPR相关(Cas)蛋白结合时,CRISPR-Cas系统可以识别和切割外源DNA或RNA,破坏病毒并保护宿主免受重复感染(Barrangou,2013)。
一种特定的CRISPR系统,来自化脓链球菌的II型CRISPR-Cas9已经被修改成用于基因组编辑的更简单的系统。利用这个系统,研究人员能够设计特定的单引导RNA(sgRNA)序列,它与具有上游原型间隔区相邻基序(PAM;'NGG')的目的基因的20bp序列互补(Jinek ...
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