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公司名称: SunriseScience

产品编号: 1001-010

Efficient Large DNA Fragment Knock-in by Long dsDNA with 3′-Overhangs Mediated CRISPR Knock-in (LOCK) in Mammalian Cells

Wenjie Han, Haojun Liang and Jianqiang Bao

Published online: 2023-10-20

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Design of Hybrid RNA Polymerase III Promoters for Efficient CRISPR-Cas9 Function

Author:

Joshua Misa, Cory Schwartz and Ian Wheeldon,

Date:

2018-03-20

[Abstract] The discovery of the CRISPR-Cas9 system from Streptococcus pyogenes has allowed the development of genome engineering tools in a variety of organisms. A frequent limitation in CRISPR-Cas9 function is adequate expression levels of sgRNA. This protocol provides a strategy to construct hybrid RNA polymerase III (Pol III) promoters that facilitate high expression of sgRNA and improved CRISPR-Cas9 function. We provide selection criteria of Pol III promoters, efficient promoter construction methods, and a sample screening technique to test the efficiency of the hybrid promoters. A hybrid ... [摘要] 来自化脓性链球菌的CRISPR-Cas9系统的发现使得在各种生物体中开发基因组工程工具成为可能。 CRISPR-Cas9功能的频繁限制是足够的sgRNA表达水平。该协议提供了构建杂合RNA聚合酶III（Pol III）启动子的策略，其促进sgRNA的高表达和改善的CRISPR-Cas9功能。我们提供Pol III启动子的选择标准，有效的启动子构建方法以及样品筛选技术来检测杂合启动子的效率。为解脂耶氏酵母开发的杂交启动子系统将用作模型。

【背景】CRISPR（成簇定期间隔短回文重复序列）是细菌中发现的DNA序列的集合，其中含有先前曝光的病毒DNA片段（Marraffini和Sontheimer，2010）。片段被称为间隔区DNA，并且它们侧面是短的，重复的回文序列。细菌使用这些存储的间隔序列作为模板来表达RNA，以识别和攻击再次暴露的特定病毒。当与CRISPR相关（Cas）蛋白结合时，CRISPR-Cas系统可以识别和切割外源DNA或RNA，破坏病毒并保护宿主免受重复感染（Barrangou，2013）。

一种特定的CRISPR系统，来自化脓链球菌的II型CRISPR-Cas9已经被修改成用于基因组编辑的更简单的系统。利用这个系统，研究人员能够设计特定的单引导RNA（sgRNA）序列，它与具有上游原型间隔区相邻基序（PAM;'NGG'）的目的基因的20bp序列互补（Jinek ...

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