| Generation of the Compression-induced Dedifferentiated Adipocytes (CiDAs) Using Hypertonic Medium
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Current methods to obtain mesenchymal stem cells (MSCs) involve sampling, culturing, and expanding of primary MSCs from adipose, bone marrow, and umbilical cord tissues. However, the drawbacks are the limited numbers of total cells in MSC pools, and their decaying stemness during in vitro expansion. As an alternative resource, recent ceiling culture methods allow the generation of dedifferentiated fat cells (DFATs) from mature adipocytes. Nevertheless, this process of spontaneous dedifferentiation of mature adipocytes is laborious and time-consuming. This paper describes a modified protocol ...
[摘要] [摘要]目前的方法，以获得间充质干细胞（MSC）包括采样，培养，和扩大主要由脂肪，骨髓，和脐带组织的MSCs。然而，缺点是在总细胞在MSC池，和它们的衰减干性的数量有限在维生素- [R Ò扩张。作为替代资源，最近的天花板培养方法允许从成熟的脂肪细胞中生成去分化的脂肪细胞（DFAT）。然而，这种成熟脂肪细胞自发去分化的过程既费力又费时。本文描述了一种用于经修改协议在体外通过采用附加的物理刺激，其中脂肪细胞去分化TA KES扩充所述干性相关的优点的Wnt /β-catenin信号。具体来说，该协议利用含聚乙二醇（PEG）的高渗介质引入细胞外物理刺激以获得更高的效率，并引入更简单的脂肪细胞去分化程序。
[背景]脂肪组织由于其丰度大且侵袭性相对较低，因此是间充质干细胞（MSC）最具吸引力的来源之一（Shen等，2011 ；González-Cruz等，2012； Konno等人，2013）。脂肪来源的MSC，即从皮下脂肪组织的基质血管级分中分离，已被证实同时显示多谱系潜能的体外和体内（Anghileri等人，2008;冈萨雷斯。等人，2009;冈萨雷斯-雷伊等等人，2010； Jumabay等人，2010； Mao等人，2017和2019 ；Darnell等人，2018 ...
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| An Affinity-directed Protein Missile (AdPROM) System for Targeted Destruction of Endogenous Proteins
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] We recently reported an Affinity-directed PROtein Missile (AdPROM) system for the targeted proteolysis of endogenous proteins of interest (POI) (Fulcher et al., 2016 and 2017). AdPROM consists of the Von Hippel Lindau (VHL) protein, a Cullin 2 E3 ligase substrate receptor (Bosu and Kipreos, 2008), conjugated to a high affinity polypeptide binder (such as a camelid nanobody) that recognises the target protein in cells. When introduced in cells, the target protein is recruited to the CUL2 E3 ubiquitin ligase complex for ubiquitin-mediated proteasomal degradation. For target protein ...
[摘要] 我们最近报道了一种针对内源性感兴趣蛋白（POI）的靶向蛋白水解的亲和指导PROtein导弹（AdPROM）系统（Fulcher等人，2016和2017）。 AdPROM由Von Hippel Lindau（VHL）蛋白组成，Cullin 2 E3连接酶底物受体（Bosu and Kipreos，2008），与识别细胞中靶蛋白的高亲和力多肽结合剂（如骆驼科纳米抗体）缀合。当在细胞中引入时，靶蛋白质被招募到CUL2 E3泛素连接酶复合体用于泛素介导的蛋白酶体降解。对于靶蛋白的募集，我们使用了基于人类III型纤连蛋白结构域的骆驼科动物来源的VHH结构域纳米抗体以及合成多肽单体（Sharm等人，2013; Fridy等人。，2014; Schmidt et al。，2016）。在此协议中，我们描述了生成AdPROM构建体及其在人细胞系中用于靶蛋白质破坏的详细方法。 AdPROM允许对POI进行功能表征，并且其目标蛋白质破坏的效率克服了RNA干扰方法的许多局限性，这些方法需要长时间的治疗并与脱靶效应相关联，而CRISPR / Cas9基因编辑并不总是可行的。
【背景】该协议使人们能够在哺乳动物细胞系中设计，构建和表达AdPROM VHL-nano ...
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| Establishment of a Human Cell Line Persistently Infected with Sendai Virus
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Interferon regulatory transcription factor 3 (IRF3) is a transcription factor that upon activation by virus infection promotes the synthesis of antiviral genes, such as the interferons (Hiscott, 2007). In addition to inducing genes, IRF3 triggers antiviral apoptosis by RIG-I-like receptor-induced IRF3 mediated pathway of apoptosis (RIPA), which is independent of its transcriptional activity. RIPA protects against lethal virus infection in cells and mice (Chattopadhyay et al., 2016). In the absence of RIPA, caused by genetic ablation, chemical mutagenesis or inhibition of the pattern ...
[摘要] 干扰素调节转录因子3（IRF3）是一种通过病毒感染活化促进抗病毒基因如干扰素合成的转录因子（Hiscott，2007）。除了诱导基因外，IRF3通过RIG-I样受体诱导的IRF3介导的凋亡途径（RIPA）引发抗病毒凋亡，其与其转录活性无关。 RIPA可防止细胞和小鼠的致死病毒感染（Chattopadhyay et al。，2016）。在不存在RIPA的情况下，遗传消融引起的化学诱变或模式识别受体（PRR）视黄酸诱导型基因I（RIG-1）的抑制，仙台病毒（SeV）感染不会引发细胞凋亡并持续感染（Peters等人，2008; Chattopadhyay等人，2013）。表达IRF3的野生型（WT）细胞（U4C）经历SeV诱导的凋亡;然而，缺乏IRF3表达的P2.1细胞不能引发病毒凋亡（图1）。人类IRF3的异位表达恢复了P2.1细胞的凋亡活性（P2.1 / IRF3，图1）。 SeV用作研究致病性人类病毒的模型，难以与BSL3设施配合使用。我们以前曾报道，人和小鼠细胞都可以在没有IRF3的凋亡活性的情况下建立SeV持久性（Chattopadhyay et al。，2013）。在这里，我们概述了持续的SeV感染的人类细胞系（图2）的开发的详细程序，其连续表达病毒蛋白并产生低水平的感染性病毒颗粒。
【背景】IRF3对于通过促进抗病毒基因的转录来启动宿主细胞中的抗病毒防御机制至关重要（Hiscott，2007; ...
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