| A Transient Transfection-based Cell Adhesion Assay with 293T Cells
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] The in vitro cell adhesion assay is a quantitative method for measuring selective cell adhesion to specific proteins. Traditionally, cell adhesion assays employ purified protein immobilized on a solid glass or plastic surface. Here, we describe a transient 293T cell transfection-based cell adhesion assay to study selective cell adhesion of a specific cell type to a protein of interest. In this protocol, 293T cells are transfected with a mammalian expression plasmid containing mSiglec1 cDNA or an empty plasmid as a mock control and are then cultured to form a monolayer. Subsequently, these ...
[摘要] [摘要]的体外细胞粘附分析是一种用于测量到特定蛋白选择性细胞粘附的定量方法。传统上，细胞粘附测定采用固定在固体玻璃或塑料表面上的纯化蛋白质。在这里，我们描述了基于瞬时293T细胞转染的细胞粘附试验，以研究特定细胞类型对目标蛋白质的选择性细胞粘附。在该协议中，将293T细胞用包含mSiglec1 cDNA的哺乳动物表达质粒或空质粒作为模拟对照转染，然后培养以形成单层。随后，将这些表达Siglec1和模拟转染的293T细胞单层用于表达GFP的B16F10细胞的细胞粘附测定。GFP +的数量 粘附在每个293T单层上的癌细胞是一种定量手段，用于比较癌细胞与Siglec1的选择性粘附性。该方法消除了表达和纯化目的蛋白以进行体外细胞粘附测定的需要，并且可以容易地用难以纯化的蛋白进行操作，同时保持其天然的原位结构。
关键词：细胞粘附试验，细胞粘附，癌细胞粘附试验，293T，瞬时转染，Siglec1，F荧光显微镜
[背景]细胞-细胞相互作用对于生物学过程，例如组织发育，再生，和临界形态发生，以及免疫应答和癌症转移（Gumbiner，1996 ...
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| A 3D Skin Melanoma Spheroid-Based Model to Assess Tumor-Immune Cell Interactions
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Author:
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2020-12-05
[Abstract] Three-dimensional (3D) tumor spheroids have the potential to bridge the gap between two-dimensional (2D) monolayer tumor cell cultures and solid tumors with which they share a significant degree of similarity. However, the progression of solid tumors is often influenced by the dynamic and reciprocal interactions between tumor and immune cells. Here we present a 3D tumor spheroid-based model that might shed new light on understanding the mechanisms of tumor and immune cell interactions. The model first utilizes the hanging drop assay, which serves as one of the simplest methods for generating ...
[摘要] [摘要]三维（3D）肿瘤球体具有弥合二维（2D）单层肿瘤细胞培养物与实体瘤之间的差距的潜力，它们之间有着显着的相似性。然而，实体瘤的进展通常受肿瘤与免疫细胞之间的动态相互作用和相互影响的影响。在这里，我们提出了一个基于3D肿瘤球体的模型，该模型可能会为了解肿瘤与免疫细胞相互作用的机制提供新的思路。的该模型首先利用了悬滴法，这是生成3D球体的最简单方法之一，不需要专门的设备。接下来，可以将预先建立的球体与目标免疫细胞群体直接或间接共培养。使用皮肤黑色素瘤，我们提供了该模型的详细说明，这可能对成功治疗策略的开发具有重要意义。
[背景]三维（3D）肿瘤球体是球形的自组装肿瘤细胞聚集体，类似于微转移瘤并复制实体瘤的许多特征。就像在无血管实体瘤的非增生区域一样，球体内部区域的肿瘤细胞通常表现出扰动的基因和蛋白质表达，新陈代谢改变，细胞周期停滞和坏死（Sant and Johnston ，2017）。但是，用于生成3D椭球体的大多数当前可用技术是耗时，困难和昂贵的。一种简单，快速，简便的生成3D球体的方法是使用悬滴法（Foty ...
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| Imaging Cytokine Concentration Fields Using PlaneView Imaging Devices
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Date:
2018-04-05
[Abstract] We describe here a method to visualize concentration fields of cytokines around cytokine-secreting cells. The main challenge is that physiological cytokine concentrations can be very low, in the pico-molar range. Since it is currently impossible to measure such concentrations directly, we rely on cell’s response to the cytokines–the phosphorylation of a transcription factor–that can be visualized through antibody staining. Our devices aim at mimicking conditions in dense tissues, such as lymph nodes. A small number of secreting cells is deposited on a polylysine-coated glass and covered by ...
[摘要] 我们在这里描述了一种可视化细胞因子分泌细胞周围细胞因子浓度场的方法。主要挑战是生理细胞因子浓度可能非常低，在微摩尔浓度范围内。由于目前不可能直接测量这样的浓度，我们依赖于细胞对细胞因子的反应 - 转录因子的磷酸化 - 可以通过抗体染色显现。我们的设备旨在模仿密集组织中的条件，如淋巴结。少数分泌细胞沉积在聚赖氨酸包被的玻璃上并被多层细胞因子消耗覆盖。将细胞连通1小时，之后去除顶层，并且细胞的底层被抗体标记为对细胞因子的应答。然后通过标准荧光显微镜观察细胞因子场的横截面。这篇手稿总结了我们的方法，以量化密集细胞体外细胞因子介导的细胞间通讯的程度。
【背景】哺乳动物的免疫系统已经发展到能够识别和限制潜在病原体的传播，同时使由免疫系统本身造成的附带组织损伤最小化。为了实现这一点，免疫细胞依赖细胞因子介质网络，这些细胞因子介质能够进行细胞间通讯并广播关于致病性侮辱的大小和性质的信息。大量不同细胞因子与其同源受体强烈结合，通常在纳摩尔或皮摩尔范围内具有特征性结合亲和力。通过细胞因子通讯产生免疫龛。例如，在骨髓和胸腺中，通过基质细胞分泌的白细胞介素-7（IL-7）分别支持增殖的B细胞和T细胞祖细胞的存活（Tokoyoda et al。， 2004; Alves等人，2009）。细胞因子生态位的大小控制成熟祖细胞的数量，从而保持血细胞区室平衡（Böyum，1968; ...
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