| Generation of Giant Unilamellar Vesicles (GUVs) Using Polyacrylamide Gels
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Author:
Date:
2020-11-05
[Abstract] Giant unilamellar vesicles (GUVs) are a widely used model system for a range of applications including membrane biophysics, drug delivery, and the study of actin dynamics. While several protocols have been developed for their generation in recent years, the use of these techniques involving charged lipid types and buffers of physiological ionic strength has not been widely adopted. This protocol describes the generation of large numbers of free-floating GUVs, even for charged lipid types and buffers of higher ionic strength, using a simple approach involving soft polyacrylamide (PAA) gels. ...
[摘要] [摘要]巨型单层囊泡（GUV）是一种广泛使用的模型系统，其应用范围包括膜生物物理学，药物递送以及肌动蛋白动力学研究。虽然一些协议已经为他们这一代人在最近几年已开发，利用这些T的echniques涉及带电脂质的类型和生理离子强度缓冲液一直没有得到广泛的广告Ø PTED。Thi的方案描述了使用包括聚丙烯酰胺（PAA）凝胶的简单方法，即使对于带电荷的脂质类型和更高离子强度的缓冲液，也产生了大量的自由浮动GUV。此方法需要使用（3-氨基丙基）三甲氧基硅烷（APTES）和戊二醛对玻璃盖玻片进行功能化，以允许将PAA共价键合到玻璃表面上。PAA聚合后，将凝胶真空干燥。随后，将选择的脂质均匀地分散在干燥的凝胶表面上，并且可以使用具有不同离子强度的缓冲液来重新水化凝胶并形成GUV。该协议对于在生理条件下生产大量由不同脂质组成的自由浮动GUV而言是可靠的。它可以方便地用常用的实验室试剂进行。
[背景】虽然温和的水化和电铸是两个巨的最常用的方法单层囊泡（GUV）的形成，只有少数研究，报告其使用带电脂质类型和斯坦因的生理离子强度缓冲液（等人。，2017; ...
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| A Microfluidic Device for Massively Parallel, Whole-lifespan Imaging of Single Fission Yeast Cells
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] Whole-lifespan single-cell analysis has greatly increased our understanding of fundamental cellular processes such as cellular aging. To observe individual cells across their entire lifespan, all progeny must be removed from the growth medium, typically via manual microdissection. However, manual microdissection is laborious, low-throughput, and incompatible with fluorescence microscopy. Here, we describe assembly and operation of the multiplexed-Fission Yeast Lifespan Microdissector (multFYLM), a high-throughput microfluidic device for rapidly acquiring single-cell whole-lifespan imaging. ...
[摘要] 整个寿命的单细胞分析极大地增加了我们对细胞老化等基本细胞过程的理解。为了观察整个寿命期间的个体细胞，必须从生长培养基中移除所有后代，通常通过手动显微切割。然而，手动显微切割费力，低通量，并且与荧光显微镜不兼容。在这里，我们描述了多路复用裂变酵母寿命显微解剖器（multFYLM）的组装和操作，这是一种用于快速获取单细胞全寿命成像的高通量微流体装置。 multFYLM从多达六种不同的遗传背景或治疗方案中捕获约一千个杆状裂殖酵母细胞。将固定的细胞荧光成像超过一周，而将子代细胞从装置中取出。得到的数据集产生记录每个细胞复制寿命的高分辨率多通道图像。我们预计multFYLM将广泛适用于裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）和其他对称分裂的单细胞生物的单细胞整个寿命研究。
【背景】细胞衰老导致细胞功能的累积下降，最终导致死亡。大多数关于细胞衰老的研究侧重于模型单细胞生物的复制寿命，例如出芽酵母酿酒酵母（Nyström和Liu，2014; Wasko和Kaeberlein，2014; Wierman和Smith，2014; Ruetenik和Barrientos ，2015）。细胞的复制寿命（RLS）被定义为母细胞在其生命过程中产生的女儿的数量（Henderson和Gottschling，2008; Sutphin等人，2014）。 ...
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