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Date:
2021-01-20
[Abstract] Given the scale of the ongoing COVID-19 pandemic, the need for reliable, scalable testing, and the likelihood of reagent shortages, especially in resource-poor settings, we have developed an RT-qPCR assay that relies on an alternative to conventional viral reverse transcriptases, a thermostable reverse transcriptase/DNA polymerase (RTX) (Ellefson et al., 2016). Here we show that RTX performs comparably to the other assays sanctioned by the CDC and validated in kit format. We demonstrate two modes of RTX use – (i) dye-based RT-qPCR assays that require only RTX polymerase, and (ii) TaqMan ...
[摘要] [摘要]鉴于持续进行的COVID-19大流行的规模，可靠，可扩展的测试需求以及试剂短缺的可能性（尤其是在资源匮乏的环境中），我们开发了一种n RT-qPCR分析方法，该方法依赖于其他方法与常规病毒逆转录酶相比，热稳定的逆转录酶/ DNA聚合酶（RTX）（Ellefson等，2016）。在这里，我们显示RTX与CDC认可并以试剂盒形式验证的其他检测方法具有可比性。我们演示了两种RTX使用模式-（i）仅需要RTX聚合酶的基于染料的RT-qPCR分析，以及（ii）使用RTX和Taq DNA聚合酶组合的TaqMan RT-qPCR分析（因为RTX核酸外切酶不降级ea TaqMan探针）。我们还提供了纯化该替代试剂RTX的简单方法。我们预计，在资源匮乏或需要的地方，研究人员可以获取可用的构建体，并开始开发自己的测定方法，而不论它们存在的调控框架如何。
[背景]尽管已采用多种病毒检测方法来检测SARS-CoV-2感染，包括各种分子诊断和免疫诊断测试，但逆转录酶定量聚合酶链反应（RT-qPCR）仍然是主要且最敏感的方法SARS-CoV-2检测试验（D'Cruz等，2020 ; Tang等，2020 ）。RT-qPCR的首要地位在很大程度上是因为基于抗体的测试以及快速核酸诊断平台（如Abbott ...
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