| Immuno-electrophysiology on Neuromuscular Junctions of Drosophila Third Instar Larva
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Alterations in synaptic transmission are critical early events in neuromuscular disorders. However, reliable methodologies to analyze the functional organization of the neuromuscular synapses are still needed. This manuscript provides a detailed protocol to analyze the molecular assembly of the neuromuscular synapses through immune-electrophysiology in Drosophila melanogaster. This technique allows the quantification of the molecular behavior of the neuromuscular synapses by correlating the structural configuration of the synaptic boutons with their electrical activity.
[摘要] [摘要]突触传递的改变是神经肌肉疾病的关键早期事件。但是，仍然需要可靠的方法来分析神经肌肉突触的功能组织。此马努脚本提供了详细的协议，通过在免疫电分析神经肌肉突触的分子组装果蝇黑腹果蝇。该技术通过使突触钮扣的结构构型与其电活动相关联，可以量化神经肌肉突触的分子行为。
[背景]果蝇三龄幼虫的神经肌肉接头（NMJ）的功能组织在研究突触形成和功能的分子机制方面具有突出的优势（Feiguin等，2009 ; Godena等，2011; Romano等。（2014年和2015年；Strah等人，2020年），它在包括人类在内的其他物种中似乎是保守的。在这方面，果蝇NMJs的解剖组织是由多个突触钮扣构成的，这些突触钮扣是在运动轴突的最终乔木形成的。这些结构的分化和维持负责骨骼肌的神经支配，并暗示不同分子的协调作用，专门用于建立细胞接触以及释放，接收和整合神经递质信号传导所需的机制。此外，在果蝇中开发的功能强大的遗传工具以及神经系统对单个神经元的解剖学解析，提供了难得的机会，可以在可区分细胞的组织中进行全基因组范围的分子表型无偏搜索。尽管果蝇已经存在可视化神经肌肉突触建立的单独协议（Sabeva和Bykhovskaia，2017 ; Goel等人，2019 ...
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| Electrophysiological Recordings of Evoked End-Plate Potential on Murine Neuro-muscular Synapse Preparations
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] Neuromuscular junction (NMJ) is the specialized chemical synapse that mediates the transmission of the electrical impulse running along motor neuron axons to skeletal muscle fibers. NMJ is the best characterized chemical synapse and its study along many years of research has provided most of the general knowledge of synapse development, structure and functionality.
Electrophysiology is the most accurate experimental procedure to study NMJ physiology and it largely contributed to the elucidation of synaptic transmission basic principles. Many electrophysiological techniques have ...
[摘要] 神经肌肉接头（NMM）是一种特殊的化学突触，它介导沿着运动神经元轴突运行的电脉冲传输到骨骼肌纤维。 NMJ是最具特色的化学突触，经过多年研究的研究提供了突触发育，结构和功能的大部分常识。
电生理学是研究NMJ生理学的最准确的实验程序，并且主要有助于阐明突触传递基本原理。已经开发了许多电生理学技术来研究NMJ生理学和病理生理学。在本文中，我们描述了一种可应用于研究小鼠神经 - 肌肉传递功能的电生理学组织制备方法。它在我们的实验室常规用于研究突触前神经毒素，抗毒素，并监测NMJ变性和再生。这是一种广泛适用的技术，也可用于研究神经肌肉疾病（包括外周神经病，运动神经元病和肌无力综合征）小鼠模型中NMJ活性的改变。
【背景】神经传递是神经元以快速时间尺度（通常<1毫秒）将信息传递给靶细胞的生理过程。介导这种交流的结构是突触，即神经元（前突触后神经元）或神经元（突触前神经元）和效应细胞（突触后细胞）之间形成的专门结构。神经肌肉接头（nmj）是使运动神经元和骨骼肌纤维之间能够交流的化学突触。这是最好的特征性突触，大部分关于突触的成熟，结构和功能的知识来源于其研究（li et="" al。，2016）。在nmj，沿着运动轴突运动的动作电位侵入神经末梢（突触前布顿）并诱导电压门控钙通道的开放。随后突触前神经末梢中的ca="" 2+流入触发（大约0.3μsec（kuffler等，1984））与约100个突触囊泡的突触前膜融合从准备释放池（占所有囊泡的10-20％）（del="" castillo和katz，1954;="" denker和rizzoli，2010）。每个囊泡约1000个乙酰胆碱（ach）分子在突触间隙中扩散（kuffler和yoshikami，1975），并且在大约0.5毫秒内与突触后肌纤维膜上的烟碱ach受体（nachr）结合。="" nachr是离子型配体门控na="" +="" k="" +="" +通道，它们在ach结合后开放，并通过介导大的突触后膜（端板）引起局部去极化潜力na="" +的向内通量（以及k="" +的较小向外流量）。这种局部去极化被称为诱发终板电位（eepp）（或诱发连接电位）。在小鼠中，骨骼肌纤维的静息膜电位约为-75mv，eepp的幅度约为15-30mv（取决于肌肉类型）。当eepp幅度足够高以达到或克服动作电位阈值时，电压门控na="" +="" +通道打开，从而触发动作电位进入肌肉纤维，其最终沿着肌纤维蔓延并侵入肌纤维t管。在这里，一个激发="" -="" 收缩分子机器将这个电信号转导成肌质网ca2=""> ...
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