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Date:
2018-04-20
[Abstract] This is a flow cytometry-based protocol to measure glucose uptake of mouse embryonic fibroblasts (MEFs) and breast cancer cells in vitro. The method is a slightly modified and updated version as previously described (Dong et al., 2017). Briefly, the target cells are incubated with the fluorescently tagged 2-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-2-deoxyglucose (2-NBDG) for 2 h or 30 min, and the efficiency of glucose uptake is examined using a flow cytometer. This method can be adapted to measure a variety of adipocytes, immune cells, MEFs and cancer cells.
[摘要] 这是一种基于流式细胞术的方法，用于在体外测量小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）和乳腺癌细胞的葡萄糖摄取。 该方法是稍微修改和更新的版本（Dong等人，2017）。 简言之，将靶细胞与荧光标记的2-（N-（7-硝基苯-2-基-1,3-二唑-4-基）氨基）-2-脱氧葡萄糖（2-NBDG）一起温育2小时或 30分钟，并使用流式细胞仪检查葡萄糖摄取的效率。 该方法可适用于测量各种脂肪细胞，免疫细胞，MEF和癌细胞。
【背景】葡萄糖是细胞的主要能量来源。葡萄糖转运蛋白家族（GLUT）负责跨葡萄糖转运葡萄糖（Kohn等人，1996）。葡萄糖摄取的变化可以反映细胞代谢的变化。例如，肿瘤细胞通常使用葡萄糖进行有氧糖酵解以支持其快速增殖。通常，与正常细胞相比，肿瘤细胞具有增加的葡萄糖摄取速率（Vander Heiden等人，2009）。 2-脱氧葡萄糖（2DG）是一种葡萄糖类似物，它以2-脱氧葡萄糖-6-磷酸（2DG6P）的形式积累在细胞中。 2DG6P长期以来一直是测量葡萄糖摄取的黄金标准（Yamamoto et al。，2011）。尽管放射性标记的2DG6P的测量是敏感的，但许多研究人员避免了这种方法，因为放射性物质的处理和处置需要特殊的程序。
另一种不可代谢的葡萄糖类似物是荧光标记的2-（N-（7-硝基苯-2-氧杂-1,3-二唑-4-基）氨基）-2-脱氧葡萄糖（2-NBDG）。该分子通过葡萄糖转运蛋白积聚在活细胞中，不会进入糖酵解途径。 ...
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