| In vivo Blood-brain Barrier Permeability Assays Using Clostridium perfringens Epsilon Toxin
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] In order for the brain to function properly, a carefully orchestrated homeostasis must be maintained. To help regulate this delicate balance, the brain has developed a highly selective blood-brain barrier (BBB). Under normal conditions, the BBB excludes harmful blood-borne material from the brain parenchyma. However, numerous neuropathological conditions can disrupt this barrier, causing BBB permeability and subsequent CNS dysfunction. Understanding the mechanisms involved in BBB permeability are essential to elucidating the pathology of various neurological disorders as well as identifying ...
[摘要] [摘要]为了使大脑正常工作，必须维持精心安排的体内平衡。为了帮助调节这种微妙的平衡，大脑已经形成了一种高度选择性的血脑屏障（BBB）。在正常情况下，血脑屏障将有害的血液传播物质排除在脑实质之外。然而，许多神经病理学条件可以破坏这一屏障，导致BBB通透性和随后的CNS功能障碍。了解BBB通透性的机制对于阐明各种神经系统疾病的病理学以及确定药物输送到中枢神经系统的方法至关重要。在这里，我们描述了几种在体内使用不同大小的示踪剂（包括外源性376da荧光素盐、66.5kDa牛血清白蛋白、70kDa右旋糖酐以及内源性160kDa小鼠IgG）来测量BBB在小鼠体内的通透性。当静脉注射时，这些物质会被BBB排除在健康大脑之外。然而，BBB功能障碍可使这些示踪剂进入大脑，这种积聚可通过分光光度法、荧光显微镜和免疫组织化学进行测量。我们还描述了一种利用产气荚膜梭菌epsilon毒素诱导BBB通透性的方法。最后，我们将简要讨论每种方法的优缺点及其适当的下游应用。
[背景] ...
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| A Method for Extracting the Nuclear Scaffold from the Chromatin Network
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] Each cell contains many large DNA polymers packed in a nucleus of approx. 10 μm in diameter. With histones, these DNA polymers are known to form chromatins. How chromatins further compact in the nucleus is unclear but it inevitably depends on an extensive non-chromatin nuclear scaffold. Imaging of endogenous chromatin network and the complementary scaffold that support this network has not been achieved but biochemical and proteomic investigations of the scaffold can still provide important insights into this chromatin-organizing network. However, this demands highly inclusive and ...
[摘要] 每个细胞都含有许多大型DNA聚合物，其中包含大约一个核。直径10微米。用组蛋白，已知这些DNA聚合物形成染色质。染色质在核中如何进一步致密还不清楚，但它不可避免地依赖于广泛的非染色质核支架。内源性染色质网络的成像和支持该网络的互补支架尚未实现，但支架的生化和蛋白质组学研究仍然可以提供关于该染色质组织网络的重要见解。但是，这需要高度包容和可重复的提取核支架。我们最近开发了一个简单的协议，用于从染色质中释放脚手架组件。提取物的包容性由以下观察结果证实：当从核中提取时，剩余的核染色质被释放为延伸且通常平行的染色质纤维。基本上，该方案包括纯核的产生，用Triton X-100处理细胞核以产生包膜消耗的细胞核（TxN），并在含蔗糖的缓冲液中在500mM NaCl中提取细胞核。 TxN的这个组合提取被称为TxNE。
【背景】通过蛋白质和核糖核蛋白的复杂支架，染色质在细胞核中密集并动态地压缩。与细胞骨架网络不同（Fischer和Fowler，2015），对这种核支架的显微观察在技术上是具有挑战性的。这可能反映了每个细胞核内染色质的主导地位，支架与细胞核交织在一起。核的球形排列也对成像这种支架结构造成挑战。核支架的主要元素是核层（NL）（Gruenbaum和Foisner，2015）。 ...
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