| Deoxycholate Fractionation of Fibronectin (FN) and Biotinylation Assay to Measure Recycled FN Fibrils in Epithelial Cells
|
|
Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Fibronectin (FN) is an extracellular matrix protein that is secreted by many cell types and binds predominantly to the cell surface receptor Integrin α5β1. Integrin α5β1 binding initiates the step-wise assembly of FN into fibrils, a process called fibrillogenesis. We and several others have demonstrated critical effects of fibrillogenesis on cell migration and metastasis. While immunostaining and microscopy methods help visualize FN incorporation into fibrils, with each fibril being at least 3 μm in length, the first study that developed a method to biochemically fractionate FN to quantify ...
[摘要] 纤连蛋白（FN）是一种细胞外基质蛋白，由许多细胞类型分泌，主要与细胞表面受体整合素α5β1结合。整合素α5β1结合启动FN逐步组装成原纤维，这一过程称为原纤维形成。我们和其他几个人已经证明了原纤维形成对细胞迁移和转移的关键作用。虽然免疫染色和显微镜方法有助于可视化FN掺入原纤维，每个原纤维的长度至少为3μm，但是第一项研究开发了一种生物化学分离FN以量化原纤维并入FN的方法，由Jean Schwarzbauer小组于1996年出版。我们的方案改编自原始出版物，并已在多种细胞类型上进行测试，包括如此处所示的MCF10A乳腺上皮细胞和Caki-1肾癌上皮细胞。使用两种洗涤剂提取物，将细胞FN分离成不溶于洗涤剂或掺入原纤维的FN和可溶性FN或未掺入的级分。为了确定原纤维形成是否利用FN的再循环池，我们使用了生物素标记的FN（FN-生物素）再循环测定，其已经从先前的研究中修改。使用再循环测定和脱氧胆酸盐分离方法的组合，可以定量地证明在不同实验条件下细胞中原纤维形成的程度，并确定原纤维形成的FN来源
【背景】 纤连蛋白（FN）是普遍产生的细胞外基质（ECM）组分（Uitto et al。，1989; Mao和Schwarzbauer，2005）。纤连蛋白库是转录产生的，可以通过几种生长因子如TGF-β1增加（Yokoi et al。，2002; Mimura ...
|
|
|
| Murine Hair Follicle Derived Stem Cell Transplantation onto the Cornea Using a Fibrin Carrier
|
|
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] The goal of this protocol is to establish a procedure for cultivating stem cells on a fibrin carrier to allow for eventual transplantation to the eye. The ability to transfer stem cells to a patient is critical for treatment for a variety of disorders and wound repair. We took hair follicle stem cells from the vibrissae of transgenic mice expressing a dual reporter gene under the control of the Tet-on system and the keratin 12 promoter (Meyer-Blazejewska et al., 2011). A clonal growth assay was performed to enrich for stem cells. Once holoclones formed they were transferred onto a ...
[摘要] 该方案的目标是建立一种在纤维蛋白载体上培养干细胞以允许最终移植到眼睛的程序。 将干细胞转移给患者的能力对于治疗各种疾病和伤口修复至关重要。 我们在Tet-on系统和角蛋白12启动子（Meyer-Blazejewska等人，2011）的控制下从表达双报告基因的转基因小鼠的触须中取出毛囊干细胞。 进行克隆生长测定以富集干细胞。 一旦形成holoclones，将它们转移到纤维蛋白载体上并培养以获得融合上皮细胞层。 将角膜缘干细胞缺陷（LSCD）小鼠用作移植受体以测试移植成功和最终分化为角膜上皮表型。
【背景】干细胞被广泛用作治疗工具，因此递送手段是必不可少的。实际上，许多研究人员和公司正在寻找将细胞输送到人体内以优化细胞存活以及整合到宿主组织中的最佳方式。注射方法已广泛用于动物模型，但往往导致生存和整合差。目前正在使用利用生物材料和手术装置的技术。一种用于输送干细胞的技术是纤维蛋白载体。纤维蛋白凝胶是可降解的生物聚合物，其可粘附于允许细胞附着，迁移和增殖的天然组织（Ehrbar et al。，2005）。纤维蛋白凝胶具有许多优点，包括生物相容性，受控降解（Kjaergard等人，1994; Sidelmann等人，2000），均匀细胞分布和高细胞接种效率（Swartz ，2005）。已经将纤维蛋白凝胶用于治疗皮肤烧伤（Pellegrini等人，1999; ...
|
|
|
| A Method to Injure, Dissect and Image Indirect Flight Muscle of Drosophila
|
|
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Inducing an injury specifically to Drosophila flight muscles is a difficult task, owing to the small size of the muscles and the presence of the cuticle. The protocol described below provides an easy and reproducible method to induce injury in the Drosophila flight muscles.
[摘要] 由于肌肉尺寸小和角质层的存在，特别针对果蝇飞行肌肉诱导损伤是一项艰巨的任务。 下面描述的方案提供了一种简单且可重复的方法来诱导果蝇飞行肌肉中的损伤。
【背景】脊椎动物的肌肉进行再生，这是一种归因于卫星细胞（即常驻干细胞）的过程。 我们的实验室最近表明，果蝇的肌肉具有与脊椎动物卫星细胞相似的干细胞，即昆虫卫星细胞，并显示对肌肉损伤的增殖反应（Chaturvedi等人，2017年））。 飞蝇遗传学的易用性和我们的诱导伤害的方法为解决再生生物学领域的相关问题提供了机会。 我们已经标准化了一种以更好的精确度损伤背侧纵肌（DLMs）纤维的方案，并且该方法可以用于研究损伤后肌肉中涉及的修复机制。
|
|
|