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Sorvall LYNX 4000 Superspeed Centrifuge

公司名称: Thermo Fisher Scientific
产品编号: Sorvall LYNX 4000
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Other protocol()

Heterologous Expression and Purification of the CRISPR-Cas12a/Cpf1 Protein
Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract]  This protocol provides step by step instructions (Figure 1) for heterologous expression of Francisella novicida Cas12a (previously known as Cpf1) in Escherichia coli. It additionally includes a protocol for high-purity purification and briefly describes how activity assays can be performed. These protocols can also be used for purification of other Cas12a homologs and the purified proteins can be used for subsequent genome editing experiments.


Figure 1. Timeline of activities for the ...
[摘要]  该协议提供了分步说明(图1),用于在大肠杆菌中异源表达新西兰弗朗西斯菌弗朗西丝菌Cas12a(以前称为Cpf1)。 它还包括一个高纯度纯化方案,并简要介绍如何进行活性测定。 这些方案也可以用于其他Cas12a同系物的纯化,并且纯化的蛋白质可以用于随后的基因组编辑实验。

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图1.从大肠杆菌 异源表达和纯化<弗朗西斯弗朗西丝菌 Cas12a(FnCas12a)的活动时间表

【背景】原核CRISPR-Cas免疫系统通过使用CRISPR RNA(crRNA)作为外源DNA或RNA的序列特异性靶向的指导来提供针对病毒和质粒的保护(van der Oost等人,2014; Marraffini ,2015)。 1类CRISPR-Cas系统(包含I型,III型和IV型)通常形成多亚基蛋白-cRNA效应复合物,而2类系统(包含II型,V型和VI型)依赖于单个crRNA-引导的效应物核酸酶用于目标干扰(Mohanraju et al。 2016年)。

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