| Cell-free Reconstitution of the Packaging of Cargo Proteins into Vesicles at the trans Golgi Network
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Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract] Protein sorting at the trans Golgi network (TGN) plays important roles in targeting newly synthesized proteins to their specific destinations. The aim of this proposal is to reconstitute the packaging of non-Golgi resident cargo proteins into vesicles at the TGN, utilizing rat liver cytosol, semi-intact mammalian cells and nucleotides. The protocol describes how to perform the vesicle formation assay, how to isolate vesicles and how to detect cargo proteins in vesicles. This reconstitution assay can be used to quantitatively measure the efficiency of the packaging of a specific cargo ...
[摘要] [摘要] 反式高尔基体网络（TGN）上的蛋白质分选在将新合成的蛋白质靶向其特定目的地方面起着重要作用。该提议的目的是利用大鼠肝细胞溶质，半完整的哺乳动物细胞和核苷酸，在TGN处将非高尔基驻留的货物蛋白重新包装成囊泡。该协议描述了如何进行囊泡形成测定，如何分离囊泡以及如何检测囊泡中的货物蛋白。该重构测定法可用于定量测量在特定实验条件下将特定货物蛋白包装到TGN的运输小泡中的效率。
[背景] 的反式高尔基体网络（TGN）是在分泌运送路径的必要的交通枢纽。为了确保水泡运输的保真度，真核细胞利用各种蛋白质分选设备将特定的货物蛋白质准确地包装到TGN的运输小泡中，然后运至特定的目的地（Guo 等人，2014）。为了加深我们对TGN分选过程特异性的理解，重要的是开发一种能够忠实地重构TGN囊泡形成和货物分选过程的分析方法。该测定法可用于直接和定量地测量特定因子在调节特定货物蛋白包装到运输小泡中的作用。从内质网（ER）将货物蛋白包装到COPII囊泡中的无细胞重构已得到很好的建立（Kim 等，2005; Kim 等，2007; Merte 等，2010; Yuan 等。，2018；Niu 等，2019；）。已经开发出一种体外测定法，其在TGN处重构特定货物蛋白TGN46在运输小泡中的释放（Ponnambalam 等，1996；Wakana ...
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| Quantification of Salicylic Acid (SA) and SA-glucosides in Arabidopsis thaliana
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Homeostasis between the cytoplasmic plant hormone salicylic acid (SA) and its’ inactive, vacuolar storage forms, SA-2-O-β-D-glucoside (SAG) and SA-β-D-Glucose Ester (SGE), regulates the fine-tuning of defense responses to biotrophic pathogens in Arabidopsis thaliana. This protocol describes a simplified, optimized procedure to extract and quantify free SA and total hydrolyzable SA in plant tissues using a classical HPLC-based method.
[摘要] 细胞质植物激素水杨酸（SA）与其无活性的液泡形式，SA-2-葡萄糖苷（SAG）和SA-β-D-葡萄糖酯之间的稳态 （SGE）规定了拟南芥中对营养性病原体防御反应的微调。 该协议描述了一种简化的优化程序，使用传统的基于HPLC的方法提取和定量植物组织中的游离SA和总可水解SA。
【背景】SA（2-羟基苯甲酸）是植物激素，其在叶绿体中响应于病原体攻击而合成。然后输出到细胞质中，在细胞质中建立局部和系统获得性抗性（SAR）。在广义方案中，植物对生物营养性病原体的抗性被认为是通过SA信号传导介导的，而对于坏死性病原体的抗性受茉莉酸（JA）和乙烯（ET）控制。 SA和JA / ET信号通路相互作用。 SA积累到高浓度是有毒的并导致细胞和组织损伤。因此，大多数病原体诱导的SA被UDP-葡糖基转移酶（UGT）糖基化以形成亲水的，无毒的SAG和SGE（Noutoshi等人，2012; George Thompson等人， 2017）。然后将SAG和SGE隔离在液泡中，在那里它们形成水解成活性SA的可重复使用的来源。因此，植物组织中增加的总SA（SA + SAG / ...
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