| Determination of Antibacterial Activity of Film Coatings against Four Clinically Relevant Bacterial Strains
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Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] Antibacterial coatings have currently gained great importance in biomedical technology investigations. Because of the spatial arrangement of the film coatings, evaluation of antibacterial activity presents a new challenge regarding traditional bacterial counting methods. In this protocol, four clinically relevant pathogens, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, and Staphylococcus aureus were incubated on titania mesostructured thin film coatings for 24 h. Then, cell viability was studied considering three methods: counting of the number of colony forming units ...
[摘要] [摘要]抗菌涂料目前在生物医学技术研究中具有重要意义。由于薄膜包衣的空间排列，抗菌活性的评估对传统的细菌计数方法提出了新的挑战。在此协议中，将四种临床相关病原体，鼠伤寒沙门氏菌，大肠杆菌，铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌在二氧化钛介孔薄膜涂层上孵育24小时。然后，考虑三种方法研究细胞生存力：计数菌落形成单位（CFU）的数量，活/死染色以及悬浮液中细胞外DNA的定量。首先，通过标准的盘数技术确定细菌数。其次，通过利用两种荧光染料评估细菌膜的完整性，这两种荧光染料可以区分活细菌（完整的膜）和死细菌（破膜的）。最后，通过分光光度法定量细胞外DNA 。以这种方式，上述三种技术使得能够通过定性和定量分析研究细菌的生存力。
[背景]功能性涂料，由于他们提供的材料工程领域的宝贵优势被广泛研究。它们能够引入新的表面特性，而不会改变材料的体积特性。在它们的功能中，抗菌涂层对于生物医学应用已显示出极大的重要性（Mateescu等人，2015）。从这个意义上讲，纳米技术提供了制造抗菌涂层的重要工具。我们的小组已经实现了具有广谱杀菌活性的纳米结构涂层的合成，而没有利用抗生素或排斥细菌的物质（Scilletta et al。，2019）。在这里，只有个êSUP ...
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| Detection of Catalase Activity by Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE) in Cell Extracts from Pseudomonas aeruginosa
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Author:
Date:
2018-06-05
[Abstract] Bacteria in nature and as pathogens commonly face oxidative stress which causes damage to proteins, lipids and DNA. This damage is produced by the action of reactive oxygen species (ROS) such as hydrogen peroxide (H2O2), singlet oxygen, superoxide anion and hydroxyl radical. ROS are generated by antimicrobials, environmental factors (e.g., ultraviolet radiation, osmotic stress), aerobic respiration, and host phagocytes during infective processes. Pseudomonas aeruginosa, a versatile bacterium, is a prevalent opportunistic human pathogen which possesses ...
[摘要] 自然界中的细菌和病原体通常会面临氧化应激，导致蛋白质，脂质和DNA的损伤。 这种损害是由活性氧（ROS）如过氧化氢（H 2 O 2 2），单线态氧，超氧阴离子和羟基自由基的作用产生的。 ROS在感染过程中由抗菌剂，环境因素（例如，紫外线辐射，渗透压力），有氧呼吸和宿主吞噬细胞产生。 铜绿假单胞菌是一种多功能细菌，是一种普遍的机会性人类病原体，其具有针对ROS的几种防御策略。 其中，两种过氧化氢酶（KatA和KatB）在防御多种类型的压力方面的作用得到了很好的表征。 在该协议中，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检测KatA和KatB活性。 还有人认为KatB的检测是难以捉摸的。
【背景】 P上。铜绿假单胞菌是一种无处不在的细菌，它可以以游离形式在陆地和水生栖息地中发现，或作为机会性人类病原体在免疫功能低下的个体，皮肤损伤或囊性纤维化患者中引起致命性感染。为了抵御其有氧代谢产生的ROS，寄主吞噬泡和环境因素，这种微生物具有多种抗氧化策略。其中，两个单功能的过氧化氢酶（KatA和KatB）负责将H 2 O分解成水和O 2。 KatA是主要的过氧化氢酶并具有独特的特征：它对H 2 O 2抗性，渗透保护和毒力非常稳定并且是必不可少的（Hassett等人 2000; Lee等人，2005）。有人认为，KatA的稳定性是正常生长条件下高水平活性的主要因素之一，因此， ...
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| Intracellular and Mitochondrial Reactive Oxygen Species Measurement in Primary Cultured Neurons
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Author:
Seung Hyun Baek, Yoonsuk Cho, Jeongmi Lee, Bo Youn Choi, Yuri Choi, Jin Su Park, Harkkyun Kim, Jaehoon Sul, Eunae Kim, Jae Hyung Park and Dong-Gyu Jo,
Date:
2018-06-05
[Abstract] Reactive oxygen species (ROS) are chemically reactive oxygen containing molecules. ROS consist of radical oxygen species including superoxide anion (O2•−) and hydroxyl radical (•OH) and non-radical oxygen species such as hydrogen peroxide (H2O2), singlet oxygen (O2). ROS are generated by mitochondrial oxidative phosphorylation, environmental stresses including UV or heat exposure, and cellular responses to xenobiotics (Ray et al., 2012). Excessive ROS production over cellular antioxidant capacity induces oxidative stress which ...
[摘要] 活性氧物质（ROS）是化学活性的含氧分子。 ROS由自由基氧物种组成，包括超氧化物阴离子（O2-）和羟基自由基（·OH）以及非自由基氧物种如过氧化氢（H
【背景】ROS对维持我们体内的稳态很重要（Brieger等人，2012年）。许多疾病如癌症，神经退行性疾病，心血管疾病和糖尿病与ROS有关（Datta等人，2000）。由ROS引起的DNA损伤是加速癌变过程的主要原因，并且已经积极开发靶向ROS的治疗剂（Trachootham等人，2009）。在循环系统中，异常的氧化应激增加ROS的产生，导致各种心血管疾病（Forstermann，2008）。与糖尿病有关的信号对ROS敏感，并且由异常水平ROS引起的这些信号异常导致糖尿病并发症（Baek等人，2017）。控制大脑中的ROS水平是最重要的活动之一，因为异常水平的ROS会导致多种脑部疾病。被称为阿尔茨海默病重要因素的淀粉状蛋白β导致脑中过量的ROS生成，神经元损伤（Singh等，2011），最终导致痴呆（Polidori，2004）。由活性氧产生的活性小胶质细胞分泌各种细胞因子导致神经元死亡（Heneka等人，2014）。
ROS是由线粒体中消耗的一小部分氧产生的。线粒体中产生的ROS的主要种类是超氧化物阴离子，它是电子传递链的副产物（Batandier等人，2002）。为了检测线粒体中的超氧化物，使用MitoSOX红色，线粒体超氧化物指示剂。由于三苯基鏻基团带正电，MitoSOX红可以有效地穿透磷脂双分子层，并积聚在线粒体基质中。此外，MitoSOX红的氢化乙啶可使研究人员区分超氧化物介导的氧化产物与其他非特异性信号产生的荧光信号（Robinson等人，2006; ...
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