| Murine Pancreatic Islets Transplantation under the Kidney Capsule
|
|
Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Type 1 diabetes (T1D) is an autoimmune disease caused by the lack of insulin-producing pancreatic beta cells leading to systemic hyperglycemia. Pancreatic islet transplantation is a valid therapeutic approach to restore insulin loss and to promote adequate glycemic control. Pancreatic islet transplantation in mice is an optimal preclinical model to identify new therapeutic strategies aiming at preventing rejection and optimizing post-transplant immuno-suppressive/-tolerogenic therapies.
Islet transplantation in preclinical animal models can be performed in different sites such the ...
[摘要] 1型糖尿病（T1D）是由于缺乏产生胰岛素的胰腺β细胞导致系统性高血糖症而引起的自身免疫性疾病。 胰岛移植是恢复胰岛素损失和促进充分血糖控制的有效治疗方法。 小鼠胰岛移植是一种最佳的临床前模型，用于鉴定旨在预防排斥和优化移植后免疫抑制/抗原治疗的新治疗策略。
临床前动物模型中的胰岛移植可以在不同部位进行，如肾囊，脾脏，骨髓和胰腺。 该协议描述了肾囊下的鼠胰岛移植。 这是一个被广泛接受的研究目的。 动物造成的压力很小，并导致可靠和可重复的结果。
【背景】迄今为止在小动物模型中报道了许多用于胰岛植入的备选位置，并且必须根据要使用的程序的技术优势和实验目的来选择理想的位点。 考虑到肾囊是一种血管外部位，并且它没有免疫保护，肾囊下的胰岛移植仍然是一种低死亡率的手术过程，导致几天内高血糖症逆转。 另外，肾囊下的移植允许组织学研究和胰岛功能的正式证明（Cantarelli和Piemonti，2011; Elisa Cantarelli等人，2013）。
|
|
|
| Isolation and Culture of the Islets of Langerhans from Mouse Pancreas
|
|
Author:
Date:
2016-06-20
[Abstract] The islets of Langerhans are clusters of endocrine cells located within the pancreas. Insulin-producing beta cells are the major cell type within islets, with glucagon-producing alpha cells and somatostatin-producing delta cells the other major cell types. The beta cells are the target of immune-mediated destruction in type 1 diabetes (Graham et al., 2012). Failure of beta cell function accompanied by loss of beta cell mass is also a feature of type 2 diabetes (Wali et al., 2013). Therefore studying the biology of pancreatic islets is important to understand the pathogenesis ...
[摘要] 朗格汉斯岛是位于胰腺内的内分泌细胞簇。胰岛素生成β细胞是胰岛内的主要细胞类型，产生胰高血糖素的α细胞和生长抑素生成的δ细胞是其他主要细胞类型。 β细胞是免疫介导的1型糖尿病破坏的靶标（Graham等，2012）。 β细胞功能衰竭伴有β细胞量的丧失也是2型糖尿病的特征（Wali等，2013）。因此，研究胰岛的生物学对于了解糖尿病的发病机制和开发新的疗法是重要的。这里我们描述了小鼠胰岛的分离。这需要温和的酶促和机械消化外分泌组织和密度梯度分离（Chong et al。，2004; Liu和Shapiro，1995; Thomas et al。，1998）。然后，我们将描述胰岛如何可以整体培养或分散到单个细胞中，用于各种体外和体内分析。使用该协议可靠地导致200-400个胰岛的隔离，这取决于鼠标的应变。
|
|
|
| Mitochondrial Transmembrane Potential (ψm) Assay Using TMRM
|
|
Author:
Date:
2013-12-05
[Abstract] During cellular respiration, nutrients are oxidized to generate energy through a mechanism called oxidative phosphorylation, which occurs in the mitochondria. During oxidative phosphorylation, the gradual degradation of molecules through the TCA cycle releases electrons from the covalent bonds that are broken. These electrons are captured by NAD+ through its reduction into NADH. Finally, NADH transports the electrons to the complexes of the electron chain in the internal membrane of mitochondria. These complexes use the energy released by the electrons to pump protons into the intermembrane ...
[摘要] 在细胞呼吸期间，营养物通过称为氧化磷酸化的机制被氧化以产生能量，所述机制发生在线粒体中。在氧化磷酸化过程中，分子通过TCA循环的逐渐降解从被破坏的共价键释放电子。这些电子被NAD +捕获，通过其还原成NADH。最后，NADH将电子传输到线粒体内膜中的电子链的复合物。这些复合物使用由电子释放的能量将质子泵入膜间空间，产生穿过线粒体内膜的电化学梯度，其为ATP-合酶复合物提供能量，最终产生三磷酸腺苷（ATP）。我们使用四甲基罗丹明甲酯（TMRM），一种细胞渗透性，阳离子，红色荧光染料评估线粒体膜电位（ψsub）。为了特异性地测量线粒体膜电位（ψm），我们定量了应用FCCP（线粒体电子链解偶联）之前和之后的荧光强度。应用FCCP之前和之后的强度差异具体对应于线粒体膜电位。我们通过细胞荧光法分析线粒体膜电位（ψm）。信号的总电平与解耦之后产生的信号之间的比率提供了对于单元大小差异的归一化值。此外，为了归一化我们分析的不同大小的细胞，我们已经使用IN细胞分析仪分析了活体成像中的TMRM，使得可以测量每单位线粒体膜面积的线粒体膜电位水平。因此，我们的协议也可以用于比较不同大小的细胞的线粒体膜电位。
|
|
|