| Measurement of TLR4 and CD14 Receptor Endocytosis Using Flow Cytometry
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Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] After recognizing extracellular bacterial lipopolysaccharide (LPS), the toll-like receptor 4 (TLR4)-CD14 signaling complex initiates two distinct signaling pathways–one from the plasma membrane and the other from the signaling endosomes (Kagan et al., 2008). Understanding the early stages of TLR4 signal transduction therefore requires a robust and quantitative method to measure LPS-triggered TLR4 and CD14 receptor endocytosis, one of the earliest events of LPS detection. Here, we describe a flow cytometry-based method that we used recently to study the role of the ion channel TRPM7 ...
[摘要] 在识别细胞外细菌脂多糖（LPS）后，Toll样受体4（TLR4）-CD14信号传导复合物启动两种不同的信号传导途径 - 一种来自质膜，另一种来自信号传导内体（Kagan 等。，2008）。因此，了解TLR4信号转导的早期阶段需要一种稳健且定量的方法来测量LPS触发的TLR4和CD14受体内吞作用，这是LPS检测中最早发生的事件之一。在这里，我们描述了一种基于流式细胞术的方法，我们最近用它来研究离子通道TRPM7在TLR4内吞作用中的作用（Schappe et al。，2018）。该测定依赖于用LPS刺激细胞并使用流式细胞术在不同时间点测量TLR4（或CD14）的细胞表面水平。尽管我们详细描述了来自鼠骨髓来源的巨噬细胞的TLR4和CD14的方法，但它可以很容易地适应于在各种其他信号传导环境中评估受体内吞作用。
【背景】先天免疫细胞，包括巨噬细胞和树突细胞，使用各种模式识别受体（PRR）来调查其环境中的危险和病原体相关分子模式。来自各种亚细胞区室的PRR的贩运和信号传导实现了更广泛的免疫监视，并且已成为先天免疫的重要设计原则（Brubaker et al。，2015）。细菌内毒素LPS的检测高度依赖于TLR4及其共同受体CD14。 TLR4复合物的内吞作用需要CD14，并且对于LPS诱导的巨噬细胞活化是必需的（Zanoni 等人，2011; Tan ...
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| Generation of Human iNKT Cell Lines
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Author:
Date:
2013-03-20
[Abstract] Natural killer T (NKT) cells comprise an important immunoregulatory T cell subset and express cell surface proteins characteristic of both natural killer cells and T cells. Invariant NKT (iNKT) cells are activated by lipid antigen presented in the context of CD1d molecules, in contrast to classic T cell subsets which recognize peptide antigens presented by MHC molecules. Following activation, iNKT cells rapidly secrete large amounts of cytokines and can lyse tumor cells and virally infected cells; however, iNKT cells are reduced in patients with autoimmune disease and cancer. The potential ...
[摘要] 自然杀伤T（NKT）细胞包含重要的免疫调节T细胞亚群，并表达天然杀伤细胞和T细胞特有的细胞表面蛋白。与识别由MHC分子呈递的肽抗原的经典T细胞亚群形成对比，不变NKT（iNKT）细胞被在CD1d分子的环境中存在的脂质抗原活化。激活后，iNKT细胞快速分泌大量细胞因子，并且可以裂解肿瘤细胞和病毒感染的细胞;然而，iNKT细胞在患有自身免疫性疾病和癌症的患者中减少。表征和研究iNKT细胞用于治疗目的的前瞻性用途的潜力随着刺激和扩增人iNKT细胞的能力而显着增加。在这个协议，我们描述一种生成和传播原代人类iNKT细胞的方法。具体地，从人外周血单核细胞（PBMC）分离初级iNKT细胞，然后在人IL-2存在下用照射的α-GalCer负载的自体未成熟树突细胞（DC）定期扩增。
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| Generation of Mouse iNKT Cell Lines
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Author:
Date:
2013-03-20
[Abstract] Natural killer T (NKT) cells bridge the innate and adaptive arms of the immune system, and manipulating their effector functions can have therapeutic significances in the treatment of autoimmunity, transplant biology, infectious disease and cancer. This important lymphocyte subset regulates the immune system through their potent cytokine production following the recognition of lipid antigen present in the context of the MHC class I-like CD1d molecule, in addition their ability to directly mediate cytotoxicity. Here, we describe a method of expanding mouse invariant NKT (iNKT) cell lines ...
[摘要] 自然杀伤T（NKT）细胞桥接免疫系统的先天和适应性臂，并且操纵它们的效应子功能可以在治疗自身免疫，移植生物学，传染病和癌症中具有治疗意义。 这种重要的淋巴细胞亚群通过它们在识别存在于MHC I类CD1d分子的背景中的脂质抗原之后的有效细胞因子产生，以及它们直接介导细胞毒性的能力来调节免疫系统。 在这里，我们描述了扩增小鼠不变NKT（iNKT）细胞系从使用骨髓衍生的树突状细胞从胸腺，脾或肝分离的单核细胞的方法。 这些iNKT细胞系可用于研究其共信号要求，细胞因子谱和细胞毒性功能，这将大大增强我们对iNKT细胞生物学的知识。
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