| Protocol for Increasing Carotenoid Levels in the Roots of Citrus Plants
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Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] Carotenoids in plants play several key functions such as acting as light-harvesters, antioxidants (Lado et al., 2016) or being precursors of strigolactones, abscisic acid, volatiles and other signaling compounds (Arbona et al., 2013). Although those functions are well-known in light-exposed tissues, information in belowground organs is limited because of reduced abundance of these pigments. In order to better understand the role of carotenoids in roots, we developed a methodology to increase the abundance of these pigments in underground tissues. We took advantage of the ...
[摘要] 植物中的类胡萝卜素起着几个关键作用，例如作为轻收割机，抗氧化剂（Lado等人，2016），或作为角闪石内酯，脱落酸，挥发物和其他信号传导化合物的前体（Arbona et al。，2013）。虽然这些功能在光暴露的组织中是众所周知的，但是由于这些颜料的丰度降低，地下器官中的信息受到限制。为了更好地了解类胡萝卜素在根中的作用，我们开发了一种增加地下组织中这些颜料丰度的方法。我们利用了暴露于光的柑橘根发现色素沉淀以增加类胡萝卜素含量的事实。因此，这里我们描述一种增加柑橘根类胡萝卜素的简单方法。
背景 根中的类胡萝卜素丰度是非常有限的，因此，理解这些化合物的作用变得困难。根部对光线的曝光是增加这些组织中类胡萝卜素水平的简单，快速和有用的工具，特别是当与其他基因组方法相比较时，例如过度表达类胡萝卜素生物合成途径的一些关键基因（Cao等人，2015）。
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| Isolation of Highly Pure Primary Mouse Alveolar Epithelial Type II Cells by Flow Cytometric Cell Sorting
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] In this protocol, we describe the method for isolating highly pure primary alveolar epithelial type II (ATII) cells from lungs of naïve mice. The method combines negative selection for a variety of lineage markers along with positive selection for EpCAM, a pan-epithelial cell marker. This method yields 2-3 x 106 ATII cells per mouse lung. The cell preps are highly pure and viable and can be used for genomic or proteomic analyses or cultured ex vivo to understand their roles in various biological processes.
[摘要] 在这个协议，我们描述从初始小鼠的肺分离高纯度原发性肺泡上皮细胞类型（ATII）细胞的方法。该方法结合对多种谱系标志物的阴性选择以及对于Ep上皮细胞标记物EpCAM的阳性选择。该方法每小鼠肺产生2-3×10 6个ATII细胞。细胞制品是高度纯的和可行的，并且可以用于基因组或蛋白质组分析或培养离体以了解他们在各种生物过程中的作用。
[背景] 肺的内表面由上皮细胞排列，上皮细胞的类型在形态上和功能上随着肺内的位置而变化。 ATII细胞是两种类型的上皮细胞中的一种，其排列在肺泡壁上并且已经被描述为在表面活性剂合成和分泌中起关键作用。它们也是肺内第一道防线的一部分，并且涉及在肺部感染或过敏期间引发和调节免疫应答。它们还被认为在远端肺中充当具有增殖能力和损伤后修复上皮的能力的祖细胞。 ATII分离的可用方法不产生超过80-85％纯度的细胞制品，使得它们不适合于mRNA和蛋白质表达的可靠分析。本文所述的方法是对现有方法的改进，并产生具有最高纯度的小鼠原代ATII细胞制备物，因此可以可靠地用于表达分析。对于该方法的进一步讨论，我们将读者指向该协议起源的原始出版物（Sinha等人，2016）。
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| Evaluation of Burkholderia cepacia Complex Bacteria Pathogenicity Using Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2016-10-20
[Abstract] This protocol describes two biological assays to evaluate pathogenicity of Burkholderia cepacia complex (Bcc) strains against the nematode Caenorhabditis elegans. Specifically, these two assays allow one to identify if the under-investigated Bcc strains are able to kill the nematodes by intestinal colonization (slow killing assay, SKA) or by toxins production (fast killing assay, FKA). The principal differences between the two assays rely on the different killing kinetics for worms.
[摘要] 该协议描述了评价洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）复合物（Bcc）菌株对线虫秀丽隐杆线虫的致病性的两种生物学测定。具体地，这两个测定允许人们通过肠道定殖（慢速杀灭测定，SKA）或通过毒素生产（快速杀灭测定，FKA）来鉴定未研究的Bcc菌株是否能够杀死线虫。两种测定法之间的主要差异依赖于对蠕虫的不同杀死动力学。
[背景] Burkholderia cepacia 复合体（Bcc）在革兰氏阴性多药耐药细菌中占据关键位置。它由至少20种密切相关的物种组成。许多Bcc株是多药物和抗药性的机会性人类病原体在免疫受损的个体（包括囊性纤维化（CF））患者中引起有问题的肺部感染。使用非脊椎动物宿主模型可以用于解剖毒性和致病性决定因素以及鉴定新的治疗靶点（Kothe等人，2003）。
存在用于检测液体或固体表面中针对大组宿主模型的Bcc毒力的很多测定。然而，其中一些主要集中在表型观察，其难以检测并具有低重现性（Cardona等人，2005）。在这里，我们开发了基于对存活蠕虫的分析的两种测定，其是更可重复的，并允许在测试的Bcc菌株之间容易和快速的比较。此外，这些测定允许检测Bcc对线虫的死亡机制。
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