| A Protocol for Flavonols, Kaempferol and Quercetin, Staining in Plant Root Tips
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Author:
Date:
2020-10-05
[Abstract] Flavonols are a subclass of flavonoids of the group of plant secondary metabolites. In planta, flavonols play various functions such as antioxidant and natural regulator of auxin polar transport. Many lines of evidence have shown that flavonols also contribute to human health in anti-oxidation, anti-inflammation, and even prevention some types of cancer. Several methods have been utilized to measure flavonols such as high-performance liquid chromatography (HPLC), liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), and diphenylboric acid-2-aminoethyl ester (DPBA) staining. While HPLC or ...
[摘要] [摘要]黄酮醇是植物次生代谢物中黄酮类的一个亚类。在植物中，黄酮醇具有多种功能，例如抗氧化剂和生长素极性转运的天然调节剂。许多证据表明，黄酮醇还有助于抗氧化，抗炎症甚至预防某些类型的癌症，从而对人类健康做出贡献。几种方法已用于测量黄酮醇，例如高效液相色谱（HPLC），液相色谱-质谱（LC-MS）和二苯硼酸-2-氨基乙基酯（DPBA）染色。HPLC或LC-MS可以定量测定黄酮醇的含量 DPBA染色可以提供植物中黄酮醇积累的原位视图。在该协议中，描述了对拟南芥根尖中的黄酮醇进行染色的详细步骤。将五天大的拟南芥幼苗浸入含有DPBA的溶液中，然后在共聚焦显微镜下观察黄酮醇（山ka酚和槲皮素）。
[背景]在拟南芥，黄酮醇是从缩合反应对香豆酰基辅酶A的一个分子和丙二酰-CoA的三个分子之间生物合成。Lewis等。（2011年）发现槲皮素而不是山奈酚是根型根茎植物生长素转运的抑制剂。此外，黄酮醇也可作为植物和人类的有效抗氧化剂。先前的研究调查了DPBA与黄酮醇相互作用时可以发出荧光（Sheahan和Rechnitz，1992）。基于此，DPBA已被广泛应用于检测植物中黄酮醇的积累（Nguyen等，2013、2015和2016 ； ...
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| Multiplexed GuideRNA-expression to Efficiently Mutagenize Multiple Loci in Arabidopsis by CRISPR-Cas9
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Author:
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2017-03-05
[Abstract] Since the discovery of the CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-associated protein (Cas) as an efficient tool for genome editing in plants (Li et al., 2013; Shan et al., 2013; Nekrasov et al., 2013), a large variety of applications, such as gene knock-out, knock-in or transcriptional regulation, has been published. So far, the generation of multiple mutants in plants involved tedious crossing or mutagenesis followed by time-consuming screening of huge populations and the use of the Cas9-system appeared a promising method to overcome ...
[摘要] 自从发现CRISPR（聚集的定期交织的短回文重复） - 相关蛋白（Cas）作为植物基因组编辑的有效工具（Li等人，2013; Shan等人已经出版了诸如基因敲除，敲入或转录调控等各种各样的应用，例如，2013; Nekrasov等人，2013）。到目前为止，植物中多种突变体的产生涉及繁琐的杂交或诱变，随后大量人群的耗时筛选，Cas9系统的使用似乎是有希望的方法来克服这些问题。我们设计了一种二元载体，其结合了在拟南芥UBIQUITIN10（UBQ10）启动子和引导RNA（gRNA）控制下的优化的化脓性链球菌（Caspase）密码子的编码序列）由 A驱动的表现盒。拟南芥U6 - 启动子，用于在拟南芥中进行有效的多重编辑（阎等人，2016年）。在这里，我们描述了一个逐步的方案，以经济有效的方式生成含有多个gRNA的二元载体和基于经典克隆方法的Cas9核酸酶。背景 RNA引导的Cas9系统源于针对外源DNA的细菌防御系统（Sorek等人，2013）。由于其高效率，易于处理和多重编辑的可能性，已经被认为是基因组编辑的选择方法。通常，Cas9基因编辑系统涉及单个合成RNA分子，其指导Cas9蛋白质靶向所需DNA位点以进行基因组修饰或转录控制的gRNA。 gRNA-Cas9复合物通过gRNA-DNA配对识别靶向的DNA，并需要存在原始相邻基序（PAM）。 ...
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| An Assay to Study Botrytis cinerea-infected Grapevine Leaves Primed with Pseudomonas fluorescens
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Author:
Date:
2016-10-05
[Abstract] Grapevine (Vitis vinifera L.) is susceptible to an array of diseases among them the grey mold caused by the necrotrophic fungus Botrytis cinerea that decreases grape productivity and quality. To ensure a satisfactory yield and harvest quality numerous chemical fungicides are required, but they have serious drawbacks. One alternative is the use of beneficial bacteria to improve plant health. Pseudomonas fluorescens has been shown to trigger a plant-mediated resistance response in aboveground plant tissues against fungal, oomycete, bacterial, and viral pathogens. ...
[摘要] 葡萄（葡萄（Vitis vinifera）L.）易受一系列疾病的影响，其中包括由坏死性真菌葡萄孢菌引起的灰霉病，其降低葡萄生产力和质量。为了确保令人满意的产量和收获质量，需要许多化学杀真菌剂，但它们具有严重的缺点。一个替代方案是使用有益细菌来改善植物健康。已经显示荧光假单胞菌在地上植物组织中触发植物介导的对真菌，卵菌，细菌和病毒病原体的抗性反应。触发的植物抗性通过启动状态利用植物免疫系统的机制，其提供植物在病原体感染后快速和强烈地激活防御反应的增强能力，导致较低的适合度成本。有益细菌的引发应答包括防御相关基因的诱导表达，细胞壁增强和病原体感染后次生代谢产物的产生。在该方案中，我们描述了根据Verhagen评价有益细菌荧光假单胞菌PTA-CT2对葡萄植物的引发状态及其对灰葡萄孢的抗性水平的实验设计等。 （2011）和Gruau等人。 （2015）。
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