| A Robust Mammary Organoid System to Model Lactation and Involution-like Processes
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Author:
Date:
2021-04-20
[Abstract] The mammary gland is a highly dynamic tissue that changes throughout reproductive life, including growth during puberty and repetitive cycles of pregnancy and involution. Mammary gland tumors represent the most common cancer diagnosed in women worldwide. Studying the regulatory mechanisms of mammary gland development is essential for understanding how dysregulation can lead to breast cancer initiation and progression. Three-dimensional (3D) mammary organoids offer many exciting possibilities for the study of tissue development and breast cancer. In the present protocol derived from Sumbal ...
[摘要]
[摘要]乳腺是一种高度动态的组织，在整个生殖生活中都会发生变化，包括青春期的生长以及怀孕和进化的重复周期。乳腺肿瘤诊断代表在世界女性最常见的癌症宽。研究的监管机制乳腺的发育是至关重要的理解荷兰国际集团d如何YS调节可导致乳腺癌的发生和发展。三维（3D）乳腺组织体提供了许多令人激动的可能性的研究的组织发育和乳腺癌。在第E存在衍生自协议Sumbal等人，我们描述一个简单的3D类器官系统的研究的泌乳和复古体外。我们使用成纤维细胞生长因子2 （FGF2）和催乳素刺激的原代和传代小鼠乳腺类器官来模拟小鼠乳腺泌乳和内卷过程的三个周期。这种3D模型类器官代表一个有价值的工具来研究后期产后乳腺的发育和乳腺癌，尤其是产后-相关性乳腺癌。
图形摘要：
乳腺类器官的分离和培养程序
[背景技术]的Th e是乳腺的主要功能是提供营养吨经由牛奶产量Ò新生儿。牛逼乳腺他的发展是主要发生在出生后，由几个因素，包括激素和生长因子调控的一个高度动态的过程（Brisken和拉贾拉姆，2006;斯特恩利希特，2006年）。在青春期，激素和生长因子调节基本的胚胎导管树的导管形态发生（Brisken and ...
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| In vitro STING Activation with the cGAMP-STINGΔTM Signaling Complex
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Activating the STING (stimulator of interferon genes) signaling pathway via administration of STING agonist cyclic GMP-AMP (cGAMP) has shown great promise in cancer immunotherapy. While state-of-the-art approaches have predominantly focused on the encapsulation of cGAMP into liposomes or polymersomes for cellular delivery, we discovered that the recombinant STING protein lacking the transmembrane domain (STINGΔTM) could be used as a functional carrier for cGAMP delivery and elicit type I IFN expression in STING-deficient cell lines. Using this approach, we generated anti-tumoral ...
[摘要] [摘要]通过给予STING激动剂环状GMP-AMP（cGAMP）激活STING（干扰素基因的刺激物）信号通路已显示出在癌症免疫治疗中的广阔前景。尽管目前最先进的方法主要集中在将cGAMP封装进脂质体或聚合物小体中以进行细胞递送，但我们发现缺少跨膜结构域（STINGΔTM）的重组STING蛋白可以用作cGAMP递送的功能载体。在STING缺陷型细胞系中诱导I型IFN表达。使用这种方法，我们在小鼠黑素瘤和结肠癌模型中产生了抗肿瘤免疫力，为基于STING激动剂的免疫疗法提供了潜在的可翻译平台。在这里，我们报告与cGAMP-STINGΔTM复合物的详细体外STING激活方案，以帮助研究人员进一步开发这种方法。该协议还可以轻松扩展到与STING激活相关的其他应用程序，例如控制各种类型的感染。
[背景]在过去的二十年中，STING（干扰素基因的刺激物）信号传导途径已成为免疫系统的关键特征，并有望成为针对病毒和细菌感染，自身免疫性疾病和癌症的治疗靶标。因此，递送STING激动剂以增强免疫应答已经成为学术机构和制药公司的极大兴趣领域（Ohkuri等人，2017）。尽管现有的努力主要集中在开发合成运载工具上（Shae et ...
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| Isolation of Nuclei in Tagged Cell Types (INTACT), RNA Extraction and Ribosomal RNA Degradation to Prepare Material for RNA-Seq
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] Gene expression is dynamically regulated on many levels, including chromatin accessibility and transcription. In order to study these nuclear regulatory events, we describe our method to purify nuclei with Isolation of Nuclei in TAgged Cell Types (INTACT). As nuclear RNA is low in polyadenylated transcripts and conventional pulldown methods would not capture non-polyadenylated pre-mRNA, we also present our method to remove ribosomal RNA from the total nuclear RNA in preparation for nuclear RNA-Seq.
[摘要] 基因表达在多个水平上动态调节，包括染色质可及性和转录。 为了研究这些核调节事件，我们描述了我们用净化细胞核（INTACT）纯化细胞核的方法。 由于核RNA在聚腺苷酸化转录物中低并且常规下拉方法不会捕获非聚腺苷酸化前mRNA，所以我们还提出了我们的方法以从核RNA总RNA中去除核糖体RNA以准备核RNA-Seq。
【背景】分离用于基因表达实验的特定细胞类型降低了噪音并提高了实验的精确度和发现的不同表达基因的数量。用于细胞类型特异性研究的各种方法被广泛使用，每种方法都有其优点和缺点（Bailey-Serres，2013年综述）。分离特定的调控区室，如细胞核（来自细胞器，核糖体，细胞质，等等）可以进一步精确解析调控基因表达的分子事件。在这里，我们描述了一种方法，可以从冷冻组织中分离特定细胞类型的细胞核，适用于研究核基因表达的实验（例如，核RNA的RNA-Seq，ATAC-Seq，ChIP -Seq，等。）。此外，我们描述了RNA的处理，导致材料适合作为RNA-Seq实验的输入。这里描述的方案与水稻根组织（日本野生稻栽培品种日本晴）（Reynoso等人，2018年）一起使用，但是它们基于以前开发的方案， （拟订和Henikoff，2010年和2011年）和番茄（罗恩等人，2014年）。
该协议的第一部分，INTACT方法（用于标记特定细胞类型的核的分离）允许体内亲和标记和随后从感兴趣的细胞类型中纯化细胞核。这是通过由包膜靶向结构域，GFP和生物素连接酶识别肽（BLRP）组成的三联核标签融合蛋白（NTF）的细胞类型特异性表达实现的。 ...
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