| Efficient Transient Gene Knock-down in Tobacco Plants Using Carbon Nanocarriers
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] Gene knock-down in plants is a useful approach to study genotype-phenotype relationships, render disease resistance to crops, and enable efficient biosynthesis of molecules in plants. Small interfering RNA (siRNA)-mediated gene silencing is one of the most common ways to achieve gene knock-down in plants. Traditionally, siRNA is delivered into intact plant cells by coding the siRNA sequences into DNA vectors, which are then delivered through viral and/or bacterial methods. In this protocol, we provide an alternative direct delivery method of siRNA molecules into intact plant cells for ...
[摘要] [摘要]植物基因敲低是研究基因型与表型关系，提高作物对病害的抵抗力以及实现植物分子高效生物合成的有用方法。小干扰RNA（siRNA）介导的基因沉默是在植物中实现基因敲低的最常见方法之一。传统上，通过将siRNA序列编码到DNA载体中，将siRNA传递到完整的植物细胞中，然后通过病毒和/或细菌方法传递。在这个协议中，我们提供的siRNA分子的替代直接递送方法为完整的植物细胞的高效瞬时根Ë击倒在模型的烟草植物，烟草本塞姆氏烟草，叶子。我们的方法使用一维碳基纳米材料，单壁碳纳米管（SWNTs）来传递siRNA，而不依赖于病毒/细菌的传递。我们方法的独特优势在于：i ）不需要对siRNA序列进行DNA编码； ii）与非生物方法相比，这种非生物方法可在更广泛的植物物种中起作用，并且iii）使用非生物递送时，调节并发症更少方法，其中基因沉默是瞬时的，而无需对植物基因组进行永久性修饰。
图形摘要：
图形抽象标题
[背景技术[ 0002 ]在1990年代初，植物研究人员研究矮牵牛花的着色发现了通过RNA干扰（RNAi）引起的基因沉默（Van der ...
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| RNA-Seq Library Generation from Rare Human Cells Isolated by FACS
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Author:
Date:
2013-06-20
[Abstract] High throughput RNA Sequencing has revolutionized transcriptome analyses. However, most available protocols require micrograms of RNA rendering this technique not feasible for analyzing small numbers of cells, including precious rare cell types isolated from human tissues or organs. Here, we used an RNA Amplification System and describe a method for preparing RNA sense-strand cDNA libraries compatible with an Illumina sequencing platform starting from limited numbers of human fetal germ cells as well as human embryonic stem cells (hESCs) isolated using Fluorescence Activated Cell Sorting ...
[摘要] 高通量RNA测序革新了转录组分析。 然而，大多数可用的协议需要微克RNA，使得这种技术不可能用于分析少量的细胞，包括从人体组织或器官分离的珍贵的稀有细胞类型。 在这里，我们使用RNA扩增系统，并描述了一种制备RNA有义链cDNA文库的方法，其与Illumina测序平台相容，从有限数目的人胎儿生殖细胞以及使用荧光活化细胞分离的人胚胎干细胞（hESC） 排序（FACS）。 使用这个协议，我们生成七个RNA Seq库开始从4,000生殖细胞从胎儿卵巢（n = 2）和胎儿睾丸（n = 2）在16-16.5周的发展和4,000分选hESCs（n = 3）排序。 我们预测多重文库也可以通过用多重兼容的3'衔接子和索引的PCR引物替换这里使用的单重3'衔接子来产生。
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