| Identification and Quantitation of Leukocyte Populations in Human Kidney Tissue by Multi-parameter Flow Cytometry
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Inflammatory immune cells play direct pathological roles in cases of acute kidney injury (AKI) and chronic kidney disease (CKD). However, the identification and characterization of distinct populations of leukocytes in human kidney biopsies have been confounded by the limitations of immunohistochemical (IHC)-based techniques used to detect them. This methodology is not amenable to the combinations of multiple markers necessary to unequivocally define discrete immune cell populations. We have developed a multi-parameter, flow cytometric-based approach that addresses the need for panels of ...
[摘要] 炎症性免疫细胞在急性肾损伤（AKI）和慢性肾病（CKD）的病例中发挥直接的病理作用。然而，人肾活组织检查中不同白细胞群的鉴定和表征已被用于检测它们的基于免疫组织化学（IHC）的技术的局限性所混淆。该方法不适用于明确定义离散免疫细胞群所必需的多种标志物的组合。我们开发了一种多参数，基于流式细胞仪的方法，解决了在鉴定免疫细胞群体时需要细胞特异性标记组，从而允许从单个临床肾活检标本中准确检测和定量白细胞亚群。在该方法中，将新鲜的人肾组织解离成单细胞悬浮液，然后进行抗体标记和基于流式细胞术的采集和分析。这种新技术为鉴定和计数人类肾脏疾病中的免疫细胞亚群提供了重大进步，并且是补充临床肾脏活组织检查的传统组织病理学检查的有力平台。
【背景】 肾脏疾病的发病率和患病率正在上升，给全世界的医疗保健社区带来了沉重的负担，并显着影响了患者的生活质量（世界肾脏日：慢性肾病，2015年）。肾脏损害可能由多种损伤引起，包括感染，缺血，毒素，高血压，遗传和代谢紊乱（Imig和Ryan，2013）。对功能性损伤的即时反应是急性肾损伤（AKI），这是一种临床综合征，其特征在于生理上通过肾功能的快速（数小时至数天）降低和组织形态学上通过炎性免疫细胞浸润到肾小管中，组织隔室邻接小管。肾脏（Basile ...
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| Isolation of LYVE-1+ Endothelial Cells from Mouse Embryos
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1, or LYVE-1, is a type 1 integral membrane glycoprotein expressed by lymphatic endothelial cells (LECs). LYVE-1 is commonly used as a biological marker to visually distinguish developing lymphatic vessels from blood endothelial cells (arteries or veins). As our understanding of lymphatic biology is still lacking today, the need to isolate LECs apart from other endothelial cells has taken on greater importance. The following procedure describes a magnetic bead separation procedure for isolating LEC-rich populations of cells from developing ...
[摘要] 淋巴管内皮透明质酸受体1或LYVE-1是由淋巴管内皮细胞（LEC）表达的1型整合膜糖蛋白。 LYVE-1通常用作生物标记物，以在视觉上区分发育中的淋巴管与血液内皮细胞（动脉或静脉）。 由于我们今天仍然缺乏对淋巴生物学的理解，因此将LEC与其他内皮细胞分离的必要性变得更加重要。 以下程序描述了用于从发育中的小鼠胚胎中分离富含LEC的细胞群的磁珠分离程序。
【背景】淋巴脉管系统形成二次循环系统，其起到从组织排出细胞外液的作用，允许脂质的转运，并提供免疫细胞运输和运输功能。虽然我们对淋巴系统的理解在过去的几十年中迅速扩大，但与我们对动脉和静脉生物学的了解相比，它仍然缺乏。 LECs鉴定LYVE-1受体表达提供了区分淋巴组织的有用工具，但已知LYVE-1在其他组织中表达，包括肝和脾窦状细胞和胰腺外分泌和朗格汉斯细胞胰岛（Banerji et al。，1999）。由LYVE1基因编码，LYVE-1受体的生物学功能尚未确定，但除了跨内皮细胞的HA转运外，还有人建议参与肿瘤转移（Jackson，2003）。尽管LYVE-1在多种组织中表达，但它仍然是目前用于区分LEC与其他内皮细胞的常用标记物。该方法的目的是使用与LYVE-1抗体偶联的dynabeads以正选择方法从发育中的小鼠胚胎中分离LEC。
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| VLA-4 Affinity Assay for Murine Bone Marrow-derived Hematopoietic Stem Cells
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Author:
Date:
2017-02-20
[Abstract] Hematopoietic stem cells (HSCs) are defined by their functional ability to self-renew and to differentiate into all blood cell lineages. The majority of HSC reside in specific anatomical locations in the bone marrow (BM) microenvironment, in a quiescent non motile mode. Adhesion interactions between HSCs and their supporting BM microenvironment cells are critical for maintaining stem cell quiescence and protection from DNA damaging agents to prevent hematology failure and death. Multiple signaling proteins play a role in controlling retention and migration of bone marrow HSCs. Adhesion ...
[摘要] 造血干细胞（HSC）由其自我更新的功能能力定义，并分化成所有血细胞谱系。大多数HSC位于骨髓（BM）微环境中的特定解剖位置，处于静止非运动模式。 HSCs与其支持的BM微环境细胞之间的粘附相互作用对于维持干细胞静止和保护免受DNA损伤因子阻止血液学失败和死亡至关重要。多重信号蛋白在控制骨髓HSCs的保留和迁移中起重要作用。粘附分子参与调节造血和干细胞和祖细胞BM保留，迁移和发育的两个过程。干细胞从骨髓移动到骨髓的机制尚未完全阐明，仍然是深入研究的对象。一个重要的方面是修饰干细胞保留，迁移和发育所需的干细胞和祖细胞的粘附分子的表达和亲和力。粘附力通过粘附分子的表达，亲和力和亲合力来调节。亲和力调节与分子结合识别和结合强度有关。在这里，我们描述了在我们的研究中使用的体外 FACS测定来研究整联蛋白α4亚类β1亚单位的表达，亲和力和功能也称为VLA-4）用于小鼠骨髓保留EPCR +长期复制HSC（LT-HSC）（Gur-Cohen等人，2015）。背景整合素是介导细胞和细胞 - ...
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