| Imaging the Pharynx to Measure the Uptake of Doxorubicin in Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Caenorhabditis elegans offers an array of advantages to investigate the roles of uptake transporters. Herein, an epifluorescent microscopy approach was developed to monitor the uptake of the autofluorescent anticancer drug, doxorubicin, into the pharynx of C. elegans by organic cation transporters.
[摘要] 秀丽隐杆线虫提供了一系列优势来调查摄取转运蛋白的作用。在这里，开发了荧光显微镜方法来监测自发荧光抗癌药物多柔比星进入C的咽部。有机阳离子转运蛋白。
背景 人类细胞具有超过450个溶质载体转运蛋白，其被认为有助于摄取几种离子，营养物质以及治疗和抗癌药物（Cesar-Razquin等人，2015）。然而，大量这些摄取转运蛋白的作用和底物是未知的。线虫是一种廉价的模型生物体，它比哺乳动物细胞提供了许多优点，可以快速研究许多高度保守的生物过程。在过去十年中，这种生物一直在几个药物发现计划中发挥作用，以鉴定新型小分子，例如，作为抗微生物剂和抑制氧化应激的小分子，尽管生物活性化合物的产量不太明显（Burns等人，2010; O'Reilly等人，，2014）。我们认为如果通过摄取转运蛋白进入动物细胞的分子更多和选择性地流入，则回收率可能更高。迄今为止，已经进行了三项研究以了解摄取转运蛋白在C中的作用。 elegans （Wu et al。，1999; Cheah等人，2013; Papaluca和Ramotar，2016）。因此，该生物体中摄取转运蛋白的功能和底物特异性的表征将有利于改进用于鉴定新生物活性分子的策略。在这里，我们概述了一种监测抗癌药物多柔比星摄入到C的咽中的方法。 elegans （Papaluca和Ramotar，2016）。多柔比星自发荧光可以通过几种广泛可用的检测系统如荧光显微镜来监测。我们注意到，从这种方法可以获得若干好处，包括通过竞争多柔比星摄取来寻找转运蛋白的新型治疗底物。 ...
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| Force Measurement on Mycoplasma mobile Gliding Using Optical Tweezers
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Author:
Date:
2017-02-05
[Abstract] Dozens of Mycoplasma species, belonging to class Mollicutes form a protrusion at a pole as an organelle. They bind to solid surfaces through the organelle and glide in the direction by a unique mechanism including repeated cycles of bind, pull, and release with sialylated oligosaccharides on host animal cells. The mechanical characters are critical information to understand this unique mechanism involved in their infectious process. In this protocol, we describe a method to measure the force generated by Mycoplasma mobile, the fastest gliding species in Mycoplasma ...
[摘要] 属于类 Mollicutes 的数十种支原体物种作为细胞器在极点形成突起。它们通过细胞器与固体表面结合，并通过独特的机制沿着方向滑动，包括在宿主动物细胞上重复的结合，拉伸和释放与唾液酸化寡糖的循环。机械特征是了解传染病过程中涉及到的独特机制的关键信息。在本协议中，我们描述了一种测量由支原体（Mycoplasma）中最快的滑翔物种支原体移动产生的力的方法。该方案对于许多种滑动微生物的研究应该是有用的。
背景 表面运动系统分布在许多细菌物种上，与细菌鞭毛和真核细胞运动蛋白相比并不能很好地阐明（Jarrell和McBride，2008），尽管它们可能给我们提供了解细菌生存策略的关键信息。为了阐明动力机制，我们需要关于机械结构，能量流动以及包括速度和力在内的机械特性的信息。光学镊子是用于在显微镜下在微米范围内的微观操作或力测量的特殊方法，通过该技术，具有与介质不同的衍射指数的物体被捕获在聚焦激光束的中心（Ashkin等人，1986）。这种方法大大有助于阐明肌球蛋白，动力蛋白和驱动蛋白的运动系统的特征，现在已经成为生物物理学领域的一个方法。在这里，我们根据我们的研究（Miyata等人，2002; Tanaka等人，2016），提供了如何测量表面移动微生物产生的力的方案，对于M的滑翔机制。移动类 Mollicutes ...
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| Aniline Blue and Calcofluor White Staining of Callose and Cellulose in the Streptophyte Green Algae Zygnema and Klebsormidium
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Author:
Date:
2016-10-20
[Abstract] Plant including green algal cells are surrounded by a cell wall, which is a diverse composite of complex polysaccharides and crucial for their function and survival. Here we describe two simple protocols to visualize callose (1→3-β-D-glucose) and cellulose (1→4-β-D-glucose) and related polysaccharides in the cell walls of streptophyte green algae. Untreated or algal cells heated in NaOH are incubated in Calcofluor white (binding to β-glucans including cellulose) or Aniline blue (binding to callose), respectively. Both dyes can be visualized by epifluorescence microscopy.
[摘要] 包括绿藻细胞的植物被细胞壁包围，所述细胞壁是复合多糖的多样复合物，并且对于它们的功能和存活是至关重要的。在这里我们描述两个简单的协议，可视化胼lose质（1→3-β-D-葡萄糖）和纤维素（1→4-β-D-葡萄糖）和相关的多糖在链霉素绿藻的细胞壁。将在NaOH中加热的未处理或藻类细胞分别在Calcofluor白（结合β-葡聚糖包括纤维素）或苯胺蓝（结合胼cal质）中孵育。两种染料都可以通过落射荧光显微镜观察。
[背景] 由于其容易和快速的适用性，使用苯胺蓝显现各种株Klebsormidium sp中的胼。质。和在更艰苦的固定和免疫定位方案（Herburger和Holzinger，2015）之前使用Zygnema。应用苯胺蓝染色和单克隆抗体对胼lose质产生类似的结果（Herburger和Holzinger，2015）。 Calcofluor白色染色是观察包括细胞壁的纤维素的1→4-β-葡聚糖部分的最快方式，因为不需要预处理。
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