| Nuclei Isolation from Nematode Ascaris
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] Preparing nuclei is necessary in a variety of experimental paradigms to study nuclear processes. In this protocol, we describe a method for rapid preparation of large number of relatively pure nuclei from Ascaris embryos or tissues that are ready to be used for further experiments such as chromatin isolation and ChIP-seq, nuclear RNA analyses, or preparation of nuclear extracts (Kang et al., 2016; Wang et al., 2016).
[摘要] 在各种实验范例中准备核是必要的，以研究核过程。在本协议中，我们描述了一种从准备用于进一步实验（如染色质分离和ChIP-seq，核RNA）的蛔虫胚胎或组织快速制备大量相对纯的核的方法分析或准备核提取物（Kang等人，2016; Wang等人，2016）。
背景 核分离通常是研究核事件的分子和生物化学方面的第一步。已经开发了几种方法来分离来自不同组织和细胞类型的细胞核。然而，除了C以外的线虫的细胞核分离方案很少。已经描述了线索，（Ooi等人，2010; Zanin等人，2011; Haenni等人，2012， ）。已经使用寄生线虫蛔虫的胚胎来制备用于体外无细胞系统的各种提取物（Cohen等人，2004） ; Lall等人，2004）。然而，这些提取物通常是全细胞提取物。在这里，我们描述了从线虫蛔虫制备细胞核的方法。
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| ARP2/3 Phosphorylation Assay in the Presence of Recombinant Bacterial Effectors
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] The Actin-Related Protein 2/3 (ARP2/3) complex is an actin nucleator that generates a branched actin network in mammalian cells. In addition to binding nucleation promoting factors, LeClaire et al. demonstrated that its phosphorylation state is essential key for its activity (LeClaire et al., 2008). In cells, the ARP2/3 complex is phosphorylated on threonine and tyrosine residues of the ARP2, ARP3, and ARPC1 subunits (Vadlamudi et al., 2004; LeClaire et al., 2008; Narayanan et al., 2011; LeClaire et al., 2015). In particular, ...
[摘要] 肌动蛋白相关蛋白2/3（ARP2 / 3）复合物是在哺乳动物细胞中产生支链肌动蛋白网络的肌动蛋白成核剂。除了结合成核促进因子之外，LeClaire等人。证明其磷酸化状态是其活性的关键（LeClaire等人，2008）。在细胞中，ARP2 / 3复合物在ARP2，ARP3和ARPC1亚基的苏氨酸和酪氨酸残基上磷酸化（Vadlamudi等人，2004; LeClaire等人）。 ，2008; Narayanan等人，2011; LeClaire等人，2015）。特别地，ARP2亚基的苏氨酸237和238的磷酸化对于允许将ARP2 / 3复合物结构改变为其活性构象是必要的（Narayanan等人，2011; LeClaire等人al ，2015）。虽然对于真核细胞中的许多功能很重要，但ARP2 / 3复合物活性也有利于多种细胞病原体（Haglund和Welch，2011; Welch和Way，2013）。最近，我们证明细菌病原体，嗜肺军团菌，使用注射在宿主细胞质细胞中的细菌蛋白激酶来操纵ARP2 / 3复合磷酸化状态（Michard等人，2015） ）。在这里，我们描述如何测试细菌蛋白激酶或另一种蛋白激酶在体外上下文中磷酸化ARP2 / 3复合物的能力。首先，产生和纯化ARP2 / 3复合物和细菌蛋白激酶。然后，将纯化的蛋白质在ATP存在下培养，并通过Western印迹分析ARP2 / ...
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| HIV-1 Virus-like Particle Budding Assay
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Author:
Date:
2013-07-20
[Abstract] Viral replication culminates with the egress of the mature virion from the host cell. This step of the viral life cycle has recently garnered increased attention with the discovery of the cellular restriction factor, Tetherin, which tethers budded virions to the surface of infected cells and inhibits viral spread. The importance of this block in viral infections has been suggested by the discovery of viral antagonists, such as HIV-1 Vpu, which counteract Tetherin. This protocol describes a system to study HIV-1 budding under BSL-2 safety conditions. It takes advantage of the ability of many ...
[摘要] 病毒复制随着来自宿主细胞的成熟病毒体的流出而达到高潮。病毒生命周期的这个步骤最近通过发现细胞限制因子Tetherin而发现增加的注意力，Tetherin将暴露的病毒粒子束缚于感染细胞的表面并抑制病毒扩散。这种阻断在病毒感染中的重要性已经通过发现病毒拮抗剂如HIV-1 Vpu（其抵抗了细胞因子）而提出。该协议描述了在BSL-2安全条件下研究HIV-1芽生的系统。它利用了许多病毒基质/衣壳蛋白产生具有单个病毒蛋白（即HIV-1p24Gag）表达的非感染性病毒样颗粒（VLPs）的能力。这个协议最近用于表征在HIV-1 Vpu存在下，Tetherin亚型对VLP释放的影响（Cocka和Bates，2012）。同时表达的Tetherin和其他病毒拮抗剂可用于研究Tetherin介导的病毒芽出的限制。
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