| Generation of the Compression-induced Dedifferentiated Adipocytes (CiDAs) Using Hypertonic Medium
|
|
Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Current methods to obtain mesenchymal stem cells (MSCs) involve sampling, culturing, and expanding of primary MSCs from adipose, bone marrow, and umbilical cord tissues. However, the drawbacks are the limited numbers of total cells in MSC pools, and their decaying stemness during in vitro expansion. As an alternative resource, recent ceiling culture methods allow the generation of dedifferentiated fat cells (DFATs) from mature adipocytes. Nevertheless, this process of spontaneous dedifferentiation of mature adipocytes is laborious and time-consuming. This paper describes a modified protocol ...
[摘要] [摘要]目前的方法，以获得间充质干细胞（MSC）包括采样，培养，和扩大主要由脂肪，骨髓，和脐带组织的MSCs。然而，缺点是在总细胞在MSC池，和它们的衰减干性的数量有限在维生素- [R Ò扩张。作为替代资源，最近的天花板培养方法允许从成熟的脂肪细胞中生成去分化的脂肪细胞（DFAT）。然而，这种成熟脂肪细胞自发去分化的过程既费力又费时。本文描述了一种用于经修改协议在体外通过采用附加的物理刺激，其中脂肪细胞去分化TA KES扩充所述干性相关的优点的Wnt /β-catenin信号。具体来说，该协议利用含聚乙二醇（PEG）的高渗介质引入细胞外物理刺激以获得更高的效率，并引入更简单的脂肪细胞去分化程序。
[背景]脂肪组织由于其丰度大且侵袭性相对较低，因此是间充质干细胞（MSC）最具吸引力的来源之一（Shen等，2011 ；González-Cruz等，2012； Konno等人，2013）。脂肪来源的MSC，即从皮下脂肪组织的基质血管级分中分离，已被证实同时显示多谱系潜能的体外和体内（Anghileri等人，2008;冈萨雷斯。等人，2009;冈萨雷斯-雷伊等等人，2010； Jumabay等人，2010； Mao等人，2017和2019 ；Darnell等人，2018 ...
|
|
|
| Dissecting the Rat Mammary Gland: Isolation, Characterization, and Culture of Purified Mammary Epithelial Cells and Fibroblasts
|
|
Author:
Date:
2020-11-20
[Abstract] With the advent of CRISPR-Cas and the ability to easily modify the genome of diverse organisms, rat models are being increasingly developed to interrogate the genetic events underlying mammary development and tumorigenesis. Protocols for the isolation and characterization of mammary epithelial cell subpopulations have been thoroughly developed for mouse and human tissues, yet there is an increasing need for rat-specific protocols. To date, there are no standard protocols for isolating rat mammary epithelial subpopulations. Analyzing changes in the rat mammary hierarchy will help us elucidate ...
[摘要] [摘要]随着CRISPR-Cas的出现以及能够轻松修饰各种生物的基因组的能力，越来越多地开发大鼠模型来询问乳腺发育和肿瘤发生的遗传事件。已经为小鼠和人类组织彻底开发了用于分离和表征乳腺上皮细胞亚群的方案，但是对大鼠特异性方案的需求却在不断增长。迄今为止，还没有用于分离大鼠乳腺上皮亚群的标准方案。分析大鼠乳腺层次的变化将有助于我们阐明乳腺癌中的分子事件，乳腺癌亚型的起源细胞以及肿瘤微环境的影响。在这里，我们描述为1）大鼠乳腺上皮细胞分离开发的几种方法；2）大鼠乳腺成纤维细胞分离；3）培养大鼠乳腺上皮细胞；通过4）流式细胞仪分析和鉴定大鼠乳腺细胞；5）免疫荧光。源自该协议的细胞可用于多种目的，包括RNAseq ，药物研究，功能测定，基因/蛋白质表达分析和图像分析。
[背景]大多数与乳腺有关的研究都是在小鼠模型和人体样品中进行的。然而，由于其具有类似于人的药代动力学特征和乳腺发育，该疾病的大鼠模型正变得越来越流行（Russo等人，1990；Jiunn等人，2008； Smalley等人，2016）。像人类腺癌一样，大鼠乳腺癌也经历组织学发展阶段（Russo等，1990； Singh等，2000），并且是卵巢激素依赖性的（Thompson等，1998； ...
|
|
|
| In vivo Mouse Mammary Gland Formation
|
|
Author:
Date:
2020-07-05
[Abstract] For years, the mammary gland serves as a perfect example to study the self-renew and differentiation of adult stem cells, and the regulatory mechanisms of these processes as well. To assess the function of given genes and/or other factors on stemness of mammary cells, several In vitro assays were developed, such as mammospheres formation assay, detection of stem cell markers by mRNA expression or flow cytometry and so on. However, the capacity of reconstruction of whole mount in the cleared fat pad of recipient female mice is a golden standard to estimate the stemness of the cells. ...
[摘要] [摘要 ] 多年来，乳腺一直是研究成体干细胞的自我更新和分化以及这些过程的调控机制的完美例证。为了评估给定的基因和/或其他因素对乳腺细胞的干性，有几个函数体外测定法开发出来，如微球体由mRNA表达形成试验，干细胞标志物的检测或流式细胞术等。然而，在雌性小鼠清除的脂肪垫中整个坐骨的重建能力是估计细胞干性的黄金标准。在这里，我们描述了体内的分步操作方案 乳腺形成测定，包括准备“清除”的受体和用于植入的乳腺细胞，手术过程以及如何评估实验结果。结合通过基因编辑和/或药物处理对乳腺细胞的操作，该方案在乳腺干细胞和乳腺发育的研究中可能非常有用。
[背景 ] 作为哺乳动物最典型的器官之一，乳腺（MG）是外分泌腺，负责泌乳。MG的发育受某些性激素的控制，这些激素的水平精确地调节了MG在不同发育阶段的结构，细胞组成和功能变化（Henigighausen and Robinson，2005）。许多遗传和环境因素都参与了乳腺干细胞的调控和MG的发育。为了研究这些因素的功能和机理，已经开发了几种方法，特别是用于评估乳腺细胞的干性。先前的研究表明，只有MG的基底细胞而非管腔细胞能够在受体雌性小鼠清除的脂肪垫中重建上皮树，这表明乳腺干细胞仅存在于基底谱系中（Van Keymeulen 等，2011）。 ）。后来，包括我们在内的许多研究发现了乳腺干细胞的几种标志物（Prater ...
|
|
|