| EAE Induction by Passive Transfer of MOG-specific CD4+ T Cells
|
|
Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an animal model of multiple sclerosis (MS), which is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS). It is characterized by focal demyelination and inflammatory responses mediated by myelin-specific autoreactive CD4+ T cells. Using a passive transfer model of EAE in mice, we have demonstrated that regional specific neural signals by sensory-sympathetic communications create gateways for immune cells at specific blood vessels of the CNS, a phenomenon known as the gateway reflex (Arima et al., 2012; ...
[摘要] 实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）是多发性硬化症（MS）的动物模型，其是中枢神经系统（CNS）的慢性炎性疾病。其特征在于由髓磷脂特异性自身反应性CD4 + T细胞介导的局灶性脱髓鞘和炎症反应。在小鼠中使用EAE的被动转移模型，我们已经证明，通过感觉交感通信的区域特异性神经信号在CNS的特定血管上产生免疫细胞的网关，这被称为网关反射（Arima等， ，2012; Tracey，2012; Arima等人，2013; Sabharwal等人，2014; Arima等人。 >，2015b）。在这里，我们描述了使用新鲜分离的（MOG）特异性CD4 + T细胞或周期性再刺激的MOG特异性CD4 + T细胞系的EAE的被动转移模型的方案，其是适用于体内追踪致病性CD4 T细胞，特别是CNS（Ogura等人，2008; Arima等人） 。，2012和2015b）。
【背景】广泛接受的是，自身反应性CD4 + T细胞在MS和EAE的发病机理中起重要作用（Reboldi，2009; International Multiple Sclerosis Genetics，et al。，2011; Steinman，2014），它们是CNS的慢性炎性疾病。 ...
|
|
|
| Killer Cell Ig-like Receptors (KIR)-Binding Assay for Tumor Cells
|
|
Author:
Date:
2016-09-20
[Abstract] Natural killer (NK) cells play key roles in innate and adaptive immune responses against virus and tumor cells. Their function relies on the dynamic balance between activating and inhibiting signals through receptors that bind ligands expressed on target cells. The absence of inhibitory receptor engagement with their ligands and the presence of activating signals transmitted by activating receptors interacting with specific ligands, leads to NK cell activation (Lanier, 2005; Raulet et al., 2001). Thus, the balance of the ligands expressed for inhibitory and activating receptors ...
[摘要] 自然杀伤（NK）细胞在针对病毒和肿瘤细胞的先天和适应性免疫应答中发挥关键作用。它们的功能依赖于通过结合靶细胞上表达的配体的受体在激活和抑制信号之间的动态平衡。不存在与其配体的抑制性受体接合和通过活化受体与特异性配体相互作用传递的激活信号的存在导致NK细胞活化（Lanier，2005; Raulet等人，2001）。因此，针对抑制性和激活受体表达的配体的平衡决定了NK细胞是否将被激活以杀死靶细胞。该协议允许给NK细胞上的任何给定受体分配精确的配体特异性。因此，如果肿瘤细胞表达配体，则该方案将允许评价其与特异性受体的相互作用。特别地，通过与HLA I类重链残基和结合肽的氨基酸残基的直接接触，杀伤细胞免疫球蛋白（Ig）样受体（KIR）识别它们的配体（HLA I类分子）。该方案将允许测试氨基酸取代或其他突变对KIR与HLA I型结合的影响。我们使用该方案描述ERAP1（MHC I类抗原加工的关键组分）在调节NK细胞中的作用通过控制抑制性受体的接合来控制细胞功能（Cifaldi等人，2015）。
|
|
|
| Peptide Loading on MHC Class I Molecules of Tumor Cells
|
|
Author:
Date:
2016-09-20
[Abstract] MHC class I molecules present peptides to cytotoxic T cells allowing the immune system to scan for intracellular pathogens and mutated proteins. The generation of antigenic peptides is a multistep process that ends in the endoplasmic reticulum (ER). Only peptides with the right length and sequence will bind nascent MHC class I molecules in the ER. This protocol allows for detachment of the endogenous peptides bound to MHC class I molecules by preserving them for the binding of high affinity synthetic peptides. The complete dissociation of endogenous peptides by mild acid treatment as well as ...
[摘要] MHC I类分子将肽呈递到细胞毒性T细胞，允许免疫系统扫描胞内病原体和突变蛋白。抗原肽的产生是以内质网（ER）结束的多步过程。只有具有正确长度和序列的肽将结合ER中的新生MHC I类分子。该方案允许通过保持结合MHC I类分子的内源肽与高亲和力合成肽的结合而脱离。通过温和酸处理以及合成肽与MHC I类分子的结合来评价内源肽的完全解离，通过流式细胞术测量在细胞表面上表达的HLA I类分子。识别β2m相关HLA-A，-B，-C，-E和-G重链的小鼠抗体W6/32适合于此提议。表达表面HLA I类分子的任何肿瘤细胞系适于测定。另一个重要方面是知道肿瘤细胞系的HLA I类分型以允许选择已知的高亲和力肽。
|
|
|