| Production of Phenotypically Uniform Human Cerebral Organoids from Pluripotent Stem Cells
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Author:
Date:
2021-04-20
[Abstract] Recent advances in stem cell technology have allowed researchers to generate 3D cerebral organoids (COs) from human pluripotent stem cells (hPSCs). Indeed, COs have provided an unprecedented opportunity to model the developing human brain in a 3D context, and in turn, are suitable for addressing complex neurological questions by leveraging advancements in genetic engineering, high resolution microscopy, and tissue transcriptomics. However, the use of this model is limited by substantial variations in the overall morphology and cellular composition of organoids derived from the same ...
[摘要] [摘要]在干细胞技术的最新进展已经使研究人员能够产生3D脑类器官由人多能干细胞（（COS）hPSCs ）。事实上，COS提供了一个前所未有的机会，发展人的大脑在3D场景模型，并反过来，适用于通过利用在进步，基因工程，高分辨率显微镜处理复杂的神经系统的问题，并组织转录。然而，在U SE 该模型的模型受到源自同一多能细胞系的类器官的整体形态和细胞组成的实质性变化的限制。为了解决这些限制，我们建立了坚固的，高-通过优化的初始阶段用于生产相一致的COS效率协议胚状体（EB）形成和神经诱导。使用该协议，采购员可以重复地与产生一个均匀的尺寸，形状，以及跨多个批次的细胞组合物。˚F urthermore，类器官的是发展了延长的时间段（3 - 6个月）显示建立的相对成熟的功能，包括电生理学活性的神经元，少突胶质细胞和祖细胞的产生。因此，该平台提供了可用于研究人脑发育和相关疾病的强大实验模型。
图形摘要：
多能干细胞对脑类器官发育的概述
[背景技术]在最新进展在体外从人多能干细胞（衍生3D脑类器官（COS）的发展hPSCs ...
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| Generation and Implementation of Reporter BHK-21 Cells for Live Imaging of Flavivirus Infection
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Author:
Date:
2021-03-05
[Abstract] The genus Flavivirus within the family Flaviviridae includes many viral species of medical importance, such as yellow fever virus (YFV), Zika virus (ZIKV), and dengue virus (DENV), among others. Presently, the identification of flavivirus-infected cells is based on either the immunolabeling of viral proteins, the application of recombinant reporter replicons and viral genomes, or the use of cell-based molecular reporters of the flaviviral protease NS2B-NS3 activity. Among the latter, our flavivirus-activatable GFP and mNeptune reporters contain a quenching peptide (QP) joined to the ...
[摘要] [摘要]本属黄病毒家族中的黄病毒包括医学重要性许多病毒种类，如黄热病病毒（YFV），寨卡病毒（ZIKV）和登革热病毒（DENV），等等。目前，黄病毒感染细胞的鉴定是基于病毒蛋白的免疫标记，重组报告子复制子和病毒基因组的应用，或黄病毒蛋白酶NS2B-NS3活性的基于细胞的分子报告子的使用。在后者中，我们的黄病毒可激活的GFP和mNeptune报道分子含有通过接头连接到荧光蛋白的淬灭肽（QP），该接头由黄病毒NS2B - NS3蛋白酶（AAQRRGRIG）的切割位点组成。当病毒蛋白酶切割接头时，淬灭肽被去除，并且荧光蛋白采用促进荧光的构象。在这里，我们提供了用于表达，选择和实施表达黄病毒基因编码分子报告子的稳定BHK-21细胞的详细协议，适用于通过活细胞成像监测病毒感染。我们还将描述图像分析过程并提供所需的软件管道。我们的报告细胞允许通过活细胞成像对黄病毒的参考菌株和天然菌株实施单细胞感染动力学以及噬菌斑测定。
图形摘要：
黄病毒感染实时成像的报告基因BHK-21细胞的产生与实施工作流。
[背景]黄病毒代表了正在引起并正在重新出现的全球性威胁，可能引起动物和人类疾病，包括许多与医学有关的病毒，例如黄热病病毒（YFV），西尼罗河病毒（WNV），日本脑炎病毒（JEV），登革热病毒（DENV），并兹卡六RUS（ZIKV），等等（摹·乌尔德·所罗门，2008） ...
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| Single-cell qPCR Assay with Massively Parallel Microfluidic System
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Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] The single-cell transcriptome is the set of messenger RNA molecules expressed in one cell. It is extremely variable and changes according to external, physical and biochemical conditions. Due to sensitivity shortages, most of genetic studies use bulk samples, providing only the average gene expression. Single-cell technologies have provided a powerful approach to a more detailed understanding of the heterogenic populations and minority cells. However, since it is still a quite novel technique, standardized protocol has to be established. Single-cell qPCR, although partly limited by the number ...
[摘要] [摘要 ] 单细胞转录组是在一个细胞中表达的信使RNA分子的集合。它变化很大，并会根据外部，物理和生化条件而变化。由于敏感性不足，大多数基因研究使用大量样品，仅提供平均基因表达。单细胞技术提供了一种强大的方法，可以更详细地了解异质群体和少数细胞。然而，因为它仍然是一个相当新的技术，标准化协议具有至b e建立。尽管单细胞qPCR受基因数量的限制，但分析起来相对简单。因此，无需使用复杂的生物信息学分析就可以使用它。如本协议所述，单细胞qPCR的主要步骤包括单细胞分离，细胞裂解液，cDNA逆转录合成，cDNA库生成的扩增以及最终的定量聚合酶链反应。
[背景 ] 的单细胞转录是一套完整的在一个细胞中表达的信使RNA（mRNA）分子。它变化很大，并会根据外部，物理和生化条件而变化。因此，这是生物异质性的来源，其中来自相同环境的细胞与其他细胞相似但不相同。
由于灵敏度不足，大多数遗传研究使用大量样本，其中有数百至数千个细胞，仅提供平均基因表达。这极大地限制了少数细胞群体的研究，这可能会带来特定的特性，例如在癌症情况下的耐药性或转移能力。单细胞技术能够在单细胞水平上分析转录组，从而揭示了异源群体的复杂性。这些技术不仅应用于癌症，而且还应用于许多细胞生物学研究中，包括成年组织，干细胞，免疫细胞等。以及微生物学和病毒学等其他领域（Wen and ...
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