| Induction of Epithelial-mesenchymal Transition in MDCK II Cells
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is a reversible process of epithelial cell transdifferentiation into a mesenchymal cell, that enables initiation of cell migration. EMT plays an important role in embryonic development, tissue repair and cancer metastasis. Better understanding of cellular and molecular events during EMT will not only provide novel insights on how mammalian organism develops and how epithelial tissues regenerate, but also can identify novel therapeutic targets for cancer therapy. Here we aim to provide a detailed protocol on how to induce EMT in Madin-Darby Canine Kidney ...
[摘要] [摘要]上皮-间质转化（EMT）是上皮细胞向分化为间充质细胞的可逆过程，能够启动细胞迁移。EMT在胚胎发育，组织修复和癌症转移中起着重要作用。更好地了解EMT过程中的细胞和分子事件，不仅将为哺乳动物生物的发育以及上皮组织的再生提供新颖的见解，而且还可为癌症治疗确定新的治疗靶标。在这里，我们旨在提供有关如何在Madin-Darby犬肾脏（MDCK）II上皮细胞系中诱导EMT并在EMT诱导的细胞上进行免疫荧光染色的详细协议。
[背景]上皮细胞的特征在于细胞可塑性，即具有采用不同细胞表型的能力（Carter等，2019； Yuan等，2019）。上皮-间质转化（EMT）是上皮细胞可塑性的一种形式。在EMT期间，上皮细胞会破坏细胞间连接，使其极性失去作用，并从鳞状，长方体或柱状变为梭形并迁移，从而获得间充质细胞的特性（Kalluri和Weinberg，2009）。EMT可以通过免疫染色和测量标志物（例如E-钙粘蛋白，ZO-1，波形蛋白，纤连蛋白和N-钙粘蛋白）的表达水平进行评估（Kalluri和Weinberg，2009）。在过去十年中在EMT研究中心大多的转录因子的作用例如，SNAIL1 / 2，ZEB1 / ...
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| Measuring Intracellular Vesicle Density and Dispersion Using Fluorescence Microscopy and ImageJ/FIJI
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] Cell signalling, cell secretion, and plasma membrane repair are processes that critically rely on intracellular vesicles, important components of the endocytic and secretory pathways. More specifically, the strategic distribution of intracellular vesicles is important for diverse cellular processes. The method presented here is a simple, affordable, and efficient tool to analyze the distribution of intracellular vesicles such as lysosomes, endosomes, Golgi vesicles or secretory granules under different experimental conditions. The method is an accessible way to analyze the density and ...
[摘要] [摘要]细胞信号传导、细胞分泌和质膜修复是严重依赖于细胞内小泡的过程，这些小泡是细胞内吞和分泌途径的重要组成部分。更具体地说，细胞内囊泡的策略性分布对不同的细胞过程非常重要。该方法是一种简单、经济、有效的分析溶酶体、内体、高尔基体或分泌颗粒等细胞内囊泡分布的工具。该方法是通过结合免疫荧光和基于像素的量化软件（例如ImageJ/FIJI）来分析细胞内囊泡的密度和分散度的一种简便方法。该协议可以在科学界广泛使用，因为它利用了ImageJ/FIJI，一个免费的开源软件。通过追踪荧光囊泡相对于细胞核的位置，我们能够量化和分析它们在整个细胞中的分布。
[背景]细胞内小泡是细胞内吞和分泌途径的重要组成部分，负责维持细胞的一些重要功能。因此，许多研究集中在生理和病理条件下调控囊泡分布的途径，而其他研究则探讨了在许多重要的细胞过程中囊泡分布异常的后果。
1988年，Aunis和Bader发现分泌细胞中存在两个分泌小泡池（Aunis和Bader，1988）。第一个小池位于质膜下方，分泌不受细胞骨架的调节，而是由于与细胞骨架中的元素结合而附着在质膜上；第二个池子附着在肌动蛋白细丝上，略远离细胞膜，当第一池耗尽后，可被动员到质膜的内小叶上。这是通过膜的去极化、肌动蛋白丝的重排和细胞骨架屏障的溶解来实现的，从而使其从细胞骨架上脱离，到达胞外部位。
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| A Simple Protocol for the Immunolabelling of Arabidopsis Pollen Tube Membranes and Cell Wall Polymers
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Author:
Date:
2015-06-20
[Abstract] The pollen tube, a fast tip-growing cell, is an excellent model to study membrane and cell wall biosynthesis. Here, we describe a simple protocol using an easy to use device to perform immunofluorescence labelling of pollen tube membrane and cell wall. The use of the NucleoSpin column to perform all the steps of the immunolabelling procedure results in obtaining more intact pollen tubes.
[摘要] 花粉管，一种快速尖端生长细胞，是研究膜和细胞壁生物合成的优秀模型。 在这里，我们描述了一个简单的协议使用易于使用的设备进行免疫荧光标记花粉管膜和细胞壁。 使用NucleoSpin柱进行免疫标记过程的所有步骤导致获得更完整的花粉管。
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