| Melanoma Stem Cell Sphere Formation Assay
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Self-renewal is the ability of cells to replicate themselves at every cell cycle. Throughout self-renewal in normal tissue homeostasis, stem cell number is maintained constant throughout life. Cancer stem cells (CSCs) share this ability with normal tissue stem cells and the sphere formation assay (SFA) is the gold standard assay to assess stem cells (or cancer stem cells) self-renewal potential in vitro. When single cells are plated at low density in stem cell culture medium, only the cells endowed with self-renewal are able to grow in tridimensional clusters usually named spheres. ...
[摘要] 自我更新是细胞在每个细胞周期复制自身的能力。在正常组织体内平衡的自我更新过程中，干细胞数量在整个生命中保持不变。癌症干细胞（CSCs）与正常组织干细胞共享这种能力，球形成测定（SFA）是评估干细胞（或癌症干细胞）体外自我更新潜力的金标准测定方法。 。当单细胞在干细胞培养基中以低密度铺板时，仅具有自我更新的细胞能够在通常称为球体的三维簇中生长。近年来，SFA也用于测试几种药物，化学和天然化合物或微环境成分对干细胞自我更新能力的影响。在这里，我们将说明一个详细的方案来评估人类黑色素瘤干细胞的自我更新，作为黑色球体生长。
癌症干细胞（CSCs）首先在急性骨髓瘤白血病（Lapidot et al。，1994）中发现，然后在许多实体瘤中鉴定出包括黑素瘤。 CSCs被定义为具有自我更新和肿瘤起始能力的细胞，能够在体内再生整个肿瘤异质性。可以使用基于表型特征或生物学特性的不同方法从肿瘤块中分离CSCs，然后在体外（自我更新）和体内 （致瘤潜力）。使用细胞表面标志物的组合分离黑素瘤CSCs（Fang等人，2005; Monzani等人，2007; Schatton等人， ，2008; Boiko等人，2010; Boonyaratanakornkit等人，2010）或通过特定干细胞培养基中的培养（Perego等人， ，2010; Santini ...
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| Dissociated Retinal Cell Culture
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Author:
Date:
2014-01-20
[Abstract] The retina is a relatively simple and accessible part of the central nervous system, making it a powerful model to study cell fate specification mechanisms. Multipotent retinal progenitor cells (RPCs) give rise to seven major classes of retinal cell types. Mechanisms regulating cell fate choice in the retina depend on both cell intrinsic and environmental factors, but their relative contribution to specific cell fate decisions remains unclear. Dissociated retinal cell cultures provide a great assay to study this problem. RPCs are cultured in serum-free and extract-free medium, providing the ...
[摘要] 视网膜是中枢神经系统相对简单易用的部分，是研究细胞命运规范机制的有力模型。多能视网膜祖细胞（RPC）产生七大类视网膜细胞类型。调节视网膜细胞命运选择的机制取决于细胞内在和环境因素，但它们对特定细胞命运决定的相对贡献仍不清楚。分离的视网膜细胞培养物提供了一个很好的分析来研究这个问题。 RPC在无血清和无提取物培养基中培养，为研究者提供对环境的控制，以解决与特定分子对视网膜神经元发育的影响有关的问题。此外，分离的细胞培养物可用于通过从其正常环境中分离RPC来研究细胞内在机制的重要性（Cayouette等人，2003; Jensen和Raff，1997）。下述方法适用于RPC的克隆密度培养。在这样的培养物中，RPC彼此分离并且从后神经元分离。它们分化和分化成不同的视网膜细胞类型以形成小菌落或“克隆”。在最近的一项研究中，我们发现这些克隆与细胞数量和细胞类型组成方面在视网膜原位发生的克隆是无法区分的，这表明细胞内机制在视网膜发育中起关键作用（Cayouette et al。 ，2003）。
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| Primary Culture of SVZ-derived Progenitors Grown as Neurospheres
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Author:
Date:
2013-08-20
[Abstract] SVZ-derived progenitors grown as neurospheres is a well-known model to study neural stem cell and progenitor functions such as proliferation, differentiation/self-renewal, and migration (Durbec and Rougon, 2001). This protocol is for preparing a culture of SVZ-derived progenitors from 8 early postnatal mouse brains (P0 to P3). One week after cell plating, we can observe round floating neurospheres, each resulting from the clonal expansion of a single EGF/FGF responsive neural progenitor.
[摘要] 作为神经球生长的SVZ衍生的祖细胞是研究神经干细胞和祖细胞功能如增殖，分化/自我更新和迁移的众所周知的模型（Durbec和Rougon，2001）。 该方案用于从8只早期出生后的小鼠脑（P0至P3）制备SVZ衍生祖细胞的培养物。 细胞电镀后一周，我们可以观察到圆形浮游神经球，每个由单个EGF / FGF反应性神经祖细胞的克隆扩增产生。
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