| Isolation, BODIPY Labeling and Uptake of Exosomes in Hepatic Stellate Cells
|
|
Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Exosomes have emerged as an important mediator of intercellular communication. They are present in extracellular milieu and therefore, easily accessible by neighboring or distant cells. They carry mRNA, microRNAs and proteins within their vesicles and once internalized by recipient cells; they can modulate multiple signaling pathways with pleiotropic effects from inducing antiviral state to disease progression. We have previously shown that hepatitis C virus (HCV) infected hepatocytes or hepatoma cells harboring genome-length replicon secrete exosomes in culture supernatants. These exosomes ...
[摘要] 外来体已经成为细胞间通讯的重要介质。 它们存在于细胞外环境中，因此可以被邻近或远处的细胞轻易获得。 它们在囊泡内携带mRNA，microRNA和蛋白质，并一度被受体细胞内化; 它们可以通过诱导抗病毒状态向疾病进展调节多种信号传导途径，具有多效性。 我们以前已经显示，携带基因组长度复制子的丙型肝炎病毒（HCV）感染的肝细胞或肝癌细胞在培养上清液中分泌外泌体。 这些外来体被肝星状细胞（HSC）摄取，并在HCV感染期间激活它们以诱导纤维化。 在这里，我们描述了外来体分离和肝星状细胞摄取BODIPY标记的外来体的详细的协议。
【背景】外来体是直径为40-150nm的小的膜结合的细胞外囊泡。已在所有体液中鉴定出它们，包括尿，羊水，血清，唾液，母乳，脑脊液，鼻分泌物和组织培养的细胞系的上清液中。外泌体通过转移微小RNA（mRNA），mRNA和蛋白质来介导细胞与细胞之间的通讯。 其可被邻近或远处的细胞摄取，并随后促进受体细胞中的信号传导（Schorey等人，2015）。外泌体富含蛋白质，包括四跨膜蛋白家族成员（CD9，CD81，CD63），热休克蛋白（Hsp60，Hsp70，Hsp90）和多泡体蛋白（annexins，RabGTPases和内体分选复合物，蛋白质）。最近的研究表明，外来体可以影响免疫应答（Li等人，2013; ...
|
|
|
| Labeling Aversive Memory Trace in Mouse Using a Doxycycline-inducible Expression System
|
|
Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] A memory trace, also known as a memory engram, is theorized to be a mechanism for physical memory storage in the brain (Silva et al., 2009; Josselyn, 2010) and memory trace is associated with a specific population of neurons (Liu et al., 2012; Ramirez et al., 2013). Labeling and stimulating those neurons will activate the memory trace (Liu et al., 2012; Ramirez et al., 2013). Memory appears to be spread over different regions of the brain rather than being localized to one area. Therefore, the methods used to trace memory have the ability to ...
[摘要] 存储器跟踪（也称为存储器枚举）被理论化为大脑中物理存储器存储的机制（Silva等人，2009; Josselyn，2010），并且内存跟踪与一个 特定的神经元群体（Liu et al。，2012; Ramirez等人，2013）。 标记和刺激那些神经元将激活记忆痕迹（Liu et al。，2012; Ramirez等人，2013）。 记忆似乎分布在大脑的不同区域，而不是局限于一个区域。 因此，用于跟踪记忆的方法有能力提高我们对神经元电路的理解。 在本协议中，我们引入多西环素诱导表达系统来标记与原始记忆痕迹相关的特定神经元。
【背景】记忆痕迹是记忆被存储为大脑物理或生物化学变化的理论手段（Ryan等人，2015）。在二十世纪初德国动物学家理查德·塞蒙（Richard Semon）制定记忆追踪概念之后，记忆存储的具体过程一直是神经科学领域辩论的一个未解决的话题（Poo et al。，2016）。尽管记忆机制已经成为几十年来的争论焦点，但已经一致认为，特定的神经元被用于记忆的存储（Liu等人，2012; Ramirez等人， ...
|
|
|
| Bioluminescence Monitoring of Neuronal Activity in Freely Moving Zebrafish Larvae
|
|
Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] The proof of concept for bioluminescence monitoring of neural activity in zebrafish with the genetically encoded calcium indicator GFP-aequorin has been previously described (Naumann et al., 2010) but challenges remain. First, bioluminescence signals originating from a single muscle fiber can constitute a major pitfall. Second, bioluminescence signals emanating from neurons only are very small. To improve signals while verifying specificity, we provide an optimized 4 steps protocol achieving: 1) selective expression of a zebrafish codon-optimized GFP-aequorin, 2) ...
[摘要] 以前已经描述了基因编码的钙指示剂GFP-aequorin的斑马鱼中神经活性的生物发光监测的概念验证（Naumann等人，2010），但是仍然存在挑战。 首先，源自单一肌纤维的生物发光信号可能构成主要缺陷。 第二，仅从神经元发出的生物发光信号非常小。 为了改善信号，同时验证特异性，我们提供了一个优化的4步骤协议，实现：1）选择性表达斑马鱼密码子优化的GFP水母发光蛋白，2）在GFP-水母发光蛋白底物coelenterazine中有效浸泡幼虫3）生物发光监测神经活动 来自运动神经元的自由运动的动物执行声学逃逸和4）使用免疫组织化学验证肌肉的表达缺乏。
【背景】不同于荧光基因编码的钙指示剂（GECIs）（Grienberger和Konnerth，2012），如GCaMP家族，生物发光指示剂GFP-水母发光蛋白（Shimomura等，1962）不需要光激发，因此开启了监测神经元的新途径包括苍蝇在内的动物（Martin等，2007），小鼠（Rogers et al。，2007）和斑马鱼幼虫（Naumann et ...
|
|
|