| Mimicking Angiogenesis in vitro: Three-dimensional Co-culture of Vascular Endothelial Cells and Perivascular Cells in Collagen Type I Gels
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Angiogenesis defines the process of formation of new vascular structures form existing blood vessels, involved during development, repair processes like wound healing but also linked to pathological changes. During angiogenic processes, endothelial cells build a vascular network and recruit perivascular cells to form mature, stable vessels. Endothelial cells and perivascular cells secret and assemble a vascular basement membrane and interact via close cell-cell contacts. To mimic these processes in vitro we have developed a versatile three-dimensional culture system where ...
[摘要] 血管发生定义了形成现有血管的新血管结构的形成过程，涉及发育过程中的修复过程，如伤口愈合，还与病理变化有关。 在血管生成过程中，内皮细胞建立血管网络并招募血管周围细胞以形成成熟稳定的血管。 内皮细胞和血管周围细胞秘密并组装血管基底膜，并通过细胞间接触进行相互作用。 为了体外模拟这些过程，我们开发了一种通用的三维培养系统，其中血管周围细胞（PVC）与胶原I型凝胶中的人脐带血管内皮细胞（HUVEC）共培养。 这种共培养系统可用于通过广泛的分析选项来确定新生血管生成事件期间的生物化学和细胞过程。
【背景】内皮细胞和血管周围细胞之间的协调相互作用对于根据给定组织内的局部需要形成稳定的血管网是非常重要的。多个分子组分有助于相互作用，但仍然很少了解。需要各种生长因子来吸引内皮细胞到低氧浓度的位点，并建立新的血管，然后被血管周围细胞覆盖。两种细胞类型相互作用以分泌特定的细胞外基质并稳定新形成的血管。在过去已经建立了多个测定法来分析二维基质胶底物上的血管细胞相互作用和血管样网络形成，但是这些测定在三维细胞内提供关于血管内血管周围细胞相互作用和血管基底膜形成的初始步骤的信息是有限的维度微环境。此外，缺乏适合于培养实验的良好表征的血管周围细胞。
我们以前分离出具有血管周围特征的细胞，因为它们表达周细胞特异性标记，产生和分泌细胞外基质蛋白并在体内刺激血管生成过程（Brachvogel等，2005和2007）。这些细胞用于与人脐静脉内皮细胞建立共培养系统，并研究三维微环境中两种细胞类型相互作用后新生血管发生的关键步骤（Pitzler等，2016; ...
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| In vivo OVA-specific Cytotoxic CD8+ T Cell Killing Assay
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Author:
Date:
2016-06-20
[Abstract] Cytotoxic CD8+ T cells are responsible for the lysis of cells expressing peptides associated with MHC class I molecules and derived from infection with a pathogen or from mutated antigens. In order to quantify in vivo this antigen-specific CD8+ T cell killing activity, we use the in vivo killing assay (IVK). Here we describe the protocol for the lysis of cells expressing a CD8+ T cell epitope of the OVA protein (SIINFEKL). Mice are previously immunized with the OVA protein and 7 days after immunization, they receive a mix of target cells, ...
[摘要] 细胞毒性CD8 + T细胞负责裂解表达与MHC I类分子相关并且源自病原体感染或突变抗原的肽的细胞。为了在体内定量该抗原特异性CD8 + T细胞杀伤活性，我们使用体内杀伤试验（IVK）。在这里，我们描述了用于裂解表达OVA蛋白（SIINFEKL）的CD8 + T细胞表位的细胞的方案。小鼠先前用OVA蛋白免疫，并且在免疫后7天，它们接受从用SIINFEKL肽脉冲并用高水平的CFSE标记的天然C57BL/6脾细胞制备的靶细胞和标记的非脉冲对照细胞的混合物具有低水平的CFSE。一天后，分离受体小鼠的脾细胞并通过FACS分析以测量CFSE高度细胞和CFSE低度细胞的量。通过在免疫的和未免疫的小鼠中CFSE高与低之间的差计算裂解的百分比。
测量抗原特异性CD8 + T细胞在体内裂解其抗原的能力对评价诱导针对病原体或肿瘤抗原的适应性细胞毒性应答是非常重要的。
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| Dye Labeling of Live Nippostrongylus brasiliensis Larvae for Visualization in Host Tissue
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Author:
Date:
2016-02-20
[Abstract] Visualization of the interaction between parasitic nematodes and their host enables a better understanding of the development of the nematode during the infectious stages of its life cycle and of the effects of host response on nematode integrity in tissues. Appropriate live imaging of these nematode/host interactions, to date has been hindered by the lack of appropriate molecular tools or efficient labeling agents. Here, we present techniques for the live labeling of the nematode parasite Nippostrongylus brasiliensis (N. brasiliensis) that allows visualization of the ...
[摘要] 寄生线虫与其宿主之间的相互作用的可视化使得能够更好地理解线虫在其生命周期的感染阶段期间的发展以及宿主对组织中线虫完整性的反应的影响。 这些线虫/宿主相互作用的适当的活体成像迄今为止由于缺乏合适的分子工具或有效的标记试剂而受到阻碍。 在这里，我们提出了线虫寄生虫（Nippostrongylus brasiliensis）（ N。brasiliensis ）的活标签的技术，其允许在小鼠宿主中可视化寄生虫长达24小时。 外鞘可以用CFSE标记，允许感染性幼虫被鉴定和跟踪，直到呕吐的阶段。 感染性寄生虫的内部标记可以通过摄取NY微球来进行。 蠕虫可以继续被识别长达24小时以下的exshement。 这应适用于其他寄生线虫。
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