| CRISPR-mediated Tagging with BirA Allows Proximity Labeling in Toxoplasma gondii
|
|
Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] Defining protein interaction networks can provide key insights into how protein complexes govern complex biological problems. Here we define a method for proximity based labeling using permissive biotin ligase to define protein networks in the intracellular parasite Toxoplasma gondii. When combined with CRISPR/Cas9 based tagging, this method provides a robust approach to defining protein networks. This approach detects interaction within intact cells, it is applicable to both soluble and insoluble components, including large proteins complexes that interact with the cytoskeleton and ...
[摘要] 定义蛋白质相互作用网络可以为蛋白质复合物如何控制复杂的生物学问题提供关键信息 在这里我们定义了一种基于接近度的标记方法，使用宽容的生物素连接酶来定义细胞内寄生虫弓形虫的蛋白质网络。 当与基于CRISPR / Cas9的标记结合使用时，这种方法提供了一种可靠的方法来定义蛋白质网络。 这种方法检测完整细胞内的相互作用，它适用于可溶性和不可溶性成分，包括与细胞骨架相互作用的大型蛋白质复合物和独特的微管组织中心，其中包括顶尖复合体在顶尖复合寄生虫中。
【背景】分析蛋白质 - 蛋白质相互作用是解决蛋白质如何组装和作为大分子复合物的关键努力。传统上，通过免疫共沉淀（共-IP）和随后的质谱分析已经鉴定出蛋白质复合物。然而，一些蛋白质复合物取代基可能在co-IP的裂解，下拉和洗涤步骤期间人为失去或获得，这对于不溶性膜或需要侵蚀性溶解的结构蛋白质尤其成问题。作为co-IP的替代物，邻近依赖性生物素鉴定（BioID）提供了在正常细胞稳态期间紧邻目标靶蛋白的蛋白质“快照”（Roux等人，2012年）。 BioID利用融合到感兴趣的靶蛋白的混杂的大肠杆菌生物素蛋白连接酶（BirA）。生物素补充使得BirA融合物在30纳米内允许生物素化的近邻生物体（Roux et al。，2012; Van Itallie et al。，2013） ...
|
|
|
| Immunoblot Analysis of Histone H4 Acetylation and Histone H2A Phosphorylation in Candida albicans
|
|
Author:
Date:
2013-10-20
[Abstract] Posttranslational modifications of histones are required for different processes including transcription, replication and DNA damage repair. This protocol describes the preparation of a whole-cell extracts for the fungal pathogen Candida albicans. Furthermore, the extract is used to detect lysine acetylation of histone H4 as well as serine 129 phosphorylation of histone H2A by immunoblot analysis.
[摘要] 包括转录，复制和DNA损伤修复的不同过程需要组蛋白的翻译后修饰。 该方案描述了真菌病原体白色念珠菌的全细胞提取物的制备。 此外，提取物用于通过免疫印迹分析检测组蛋白H4的赖氨酸乙酰化以及组蛋白H2A的丝氨酸129磷酸化。
|
|
|