| Tracing Nitrogen Metabolism in Mouse Tissues with Gas Chromatography-Mass Spectrometry
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Nitrogen-containing metabolites including ammonia, amino acids, and nucleotides, are essential for cell metabolism, growth, and neural transmission. Nitrogen metabolism is tightly coordinated with carbon metabolism in the breakdown and biosynthesis of amino acids and nucleotides. Both nuclear magnetic resonance spectroscopy and mass spectrometry including gas chromatography-mass spectrometry (GC MS) and liquid chromatography (LC MS) have been used to measure nitrogen metabolism. Here we describe a protocol to trace nitrogen metabolism in multiple mouse tissues using 15N-ammonia coupled with ...
[摘要] [摘要]含氮代谢物，包括氨，氨基酸和核苷酸，对于细胞代谢，生长和神经传递至关重要。在氨基酸和核苷酸的分解和生物合成中，氮代谢与碳代谢紧密相关。核磁共振光谱法和质谱法（包括气相色谱-质谱法（GC MS）和液相色谱法（LC MS））均已用于测量氮代谢。在这里，我们描述了使用15 N氨气与GC MS结合追踪多种小鼠组织中氮代谢的方案。该协议在 包括示踪剂注射，组织制备，代谢物提取，GC MS分析和自然丰度校正的详细程序。该协议将为研究代谢活性组织（例如视网膜，脑，肝和肿瘤）中组织特异性氮提供有用的工具。
[背景]核磁共振波谱法（NMR）和质谱法（包括质谱法（GC MS）和液相色谱法（LC MS））已成功用于各种生物体的全系统代谢物测量（Fiehn，2002和20 1 6; Chokkathukalam等，2014）。但是，每种方法都有其局限性，取决于研究类型，包括绝对定量，代谢物性质，灵敏度，稳健性，同位素分析和成本效益（Chokkathukalam等人，2014）。与NMR相比，基于MS的方法具有更高的灵敏度和代谢物覆盖率，因此更加常用。稳定的同位素标记加上LC MS或GC MS可以灵敏地定量健康和患病组织或细胞中的动态代谢变化（Jang等人，2018）。LC MS与稳定的氮同位素结合揭示了谷氨酰胺氮代谢如何与癌细胞中的碳代谢协调（Wang等人，2019）。GC ...
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| 13C Tracer Studies of Metabolism in Mouse Tumor Xenografts
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Date:
2015-11-20
[Abstract] Mice are widely used for human tumor xenograft studies of cancer development and drug efficacy and toxicity. Stable isotope tracing coupled with metabolomic analysis is an emerging approach for assaying metabolic network activity. In mouse models there are several routes of tracer introduction, which have particular advantages and disadvantages that depend on the model and the questions addressed. This protocol describes the bolus i.v. route via repeated tail vein injections of solutions of stable isotope enriched tracers including 13C6-glucose and 13C5 ...
[摘要] 小鼠广泛用于癌症发展和药物功效和毒性的人肿瘤异种移植研究。 稳定同位素追踪与代谢物组学分析是一种新兴的方法来测定代谢网络活动。 在小鼠模型中，有几种示踪剂引入途径，其具有取决于模型和所解决的问题的特定优点和缺点。 该协议描述了bolus i.v. 通过重复尾静脉注射稳定的同位素富集的示踪剂的溶液的路径，所述示踪剂包括13 C 13 - 葡萄糖和13 C - 13 C - ，N 15 - ，N 15 - 谷氨酰胺。 与单次推注相比，重复注射给予更高的富集和更长的标记周期。 多次注射谷氨酰胺对于在移植肿瘤中实现充分富集是必需的。
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| Isolation and in vivo Transfer of Antigen Presenting Cells
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Author:
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2014-10-05
[Abstract] Transfer of antigen presenting cells in vivo is a method used by immunologists to examine the potency of antigen presentation by a selected population of cells. This method is most commonly used to analyze presentation of protein antigens to MHC class I or II restricted T cells, but it can also be used for studies of nonconventional antigens such as CD1-presented lipids. In a recent study focusing on CD1d-restricted glycolipid antigen presentation to Natural Killer T cells, we compared antigen presenting properties of splenic B cells, CD8αPos dendritc cells (DCs) and CD8αNeg ...
[摘要] 体内转移抗原呈递细胞是免疫学家用来检查所选择的细胞群体的抗原呈递效力的方法。该方法最常用于分析蛋白质抗原对MHC I类或II类限制性T细胞的呈递，但其也可用于非常规抗原如CD1呈递脂质的研究。在最近关于CD1d限制性糖脂抗原呈递到天然杀伤T细胞的研究中，我们比较脾B细胞，CD8αpos 树突细胞（DC）和CD8α Neg sup> DC（Arora et al。，2014）。该方案描述了用于分离这些细胞群体和将其转移到受体小鼠中以分析其抗原呈递性质的详细方法。作为总单核细胞的百分比，平均脾脏含有约1-3％骨髓树突状细胞（DC）。在绝对数量上，这转换为大约0.6-1.8×10 6个DC。为了增强脾中DC的数目，向小鼠皮下注射来自经过工程改造以表达fms相关的酪氨酸激酶3配体（Flt3L）的培养的黑素瘤细胞系（B16.Flt3L）的细胞（Mach等人。，2000）。该蛋白是与集落刺激因子-1同源的生长因子，并在造血干细胞的分化中起关键作用。将这种蛋白质作为纯化的蛋白质施用到小鼠中导致多个器官中的CD8αpos pos和CD8α阳性DC亚群的扩增。在已经植入过表达这种蛋白质的肿瘤细胞的小鼠中也观察到类似的扩增（Mach等人，2000）。根据我们的经验，来自具有可触知的B16.Flt3L肿瘤的小鼠的脾脏中高达60％的总单核细胞可以是CD11c阳性树突细胞，从而得到高达5×10 ...
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