| Structural Analysis of Bordetella pertussis Biofilms by Confocal Laser Scanning Microscopy
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Biofilms are sessile communities of microbial cells embedded in a self-produced or host-derived exopolymeric matrix. Biofilms can both be beneficial or detrimental depending on the surface. Compared to their planktonic counterparts, biofilm cells display enhanced resistance to killing by environmental threats, chemicals, antimicrobials and host immune defenses. When in biofilms, the microbial cells interact with each other and with the surface to develop architecturally complex multi-dimensional structures. Numerous imaging techniques and tools are currently available for architectural ...
[摘要] 生物膜是嵌入自生或宿主衍生的外聚合物基质中的微生物细胞的固着群落。根据表面，生物膜可以是有益的或有害的。与浮游生物相比，生物膜细胞表现出更强的抗环境威胁，化学物质，抗菌药物和宿主免疫防御能力。当处于生物膜中时，微生物细胞彼此相互作用并与表面相互作用以形成结构复杂的多维结构。目前，许多成像技术和工具可用于生物膜群落的建筑分析。这允许通过获取可以呈现无柄群落的结构特征的三维图像来检查生物膜的发展。经常使用的工具是共聚焦激光扫描显微镜。我们提出了一个详细的协议，以生长，观察和分析呼吸道人类病原体，百日咳博德特氏菌的生物膜在空间和时间。
【背景】百日咳博德特氏菌（Bordetella pertussis）是上呼吸道的专性人类病原体，引起百日咳或百日咳（Mooi，2010; Dorji et al。，2018）。 B的生物膜。百日咳在各种人造表面上以及静态，摇动和流体流动条件下形成（Mishra et al。，2005; Sloan et al。，2007 ; Serra et al。，2011）。对这些生物膜的显微评估表明，这种细菌产生不规则形状的微集落，由流体通道分隔，嵌入由细胞外DNA（eDNA），蛋白质和多糖组成的外聚合物基质中（Parise et al。，2007; Sloan et al。，2007; Serra et al。，2008; ...
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| Separation and Detection of Phosphorylated and Nonphosphorylated BvgA, a Bordetella pertussis Response Regulator, in vivo and in vitro
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Author:
Date:
2013-11-20
[Abstract] Protein phosphorylation plays a central role in signal transduction in bacteria. However, separation and detection of the phosphorylated protein from its nonphosphorylated form remain challenging. Here we describe a method to detect phosphorylation of the Bordetella pertussis response regulator BvgA, which is phosphorylated at an aspartate residue (Boulanger et al., 2013). This method is based on the proprietary adduct, Phos-tagTM, a dinuclear metal complex, which together with Zn2+ or Mn2+, forms a complex with a phosphomonoesterdianion, ...
[摘要] 蛋白质磷酸化在细菌的信号转导中起着中心作用。然而，从其非磷酸化形式分离和检测磷酸化蛋白仍然是挑战性的。在这里我们描述了检测百日咳博德特氏菌响应调节剂BvgA的磷酸化的方法，其在天冬氨酸残基被磷酸化（Boulanger等人，2013）。该方法基于专有的加合物Phos-tag TM sup/TM，其是双核金属络合物，其与Zn 2+或Mn 2+反应， ，与磷酸二酯酶形成复合物，例如应答调节剂的磷酸化天冬氨酸（Barbieri和Stock，2008; Kinoshita和Kinoshita-Kikuta，2011）。对于体内检测，在4℃下在轻度甲酸中裂解百日咳细胞以使磷酸 - 天冬氨酸键的破坏最小化，并且通过包含Phos标签的电泳（SDS-PAGE）将磷酸化的BvgA从其非磷酸化形式分离> TM 。随后通过蛋白质印迹分析检测两种形式的BvgA。还容易实现在体外用乙酰磷酸盐处理后形成的磷酸化BvgA的水平的量化。因此，该技术允许容易地评估B中BvgA磷酸化的水平。百日咳和 。大肠杆菌在不同实验室条件下在体内或在不同反应条件下在体外磷酸化后（本研究部分由NIH的Intramural Research Programme支持， NIDDK）。
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