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Author:
Date:
2013-11-20
[Abstract] Many cellular proteins interact with the cytoskeleton (both actin filaments and microtubules), either dynamically or permanently. This interaction is required during different aspects of the cell life, for example during the process of cell division. In addition, many enzymes interact transiently with actin filaments and microtubules in order to promote their cellular distribution. Several substances with inhibitory capacity can affect this binding and cause damages to cells. This protocol allows to analyze whether a protein interacts with either actin filaments or microtubules and, when ...
[摘要] 许多细胞蛋白质与细胞骨架（肌动蛋白丝和微管）相互作用，动态或永久。这种相互作用在细胞生命的不同方面是需要的，例如在细胞分裂过程中。此外，许多酶与肌动蛋白丝和微管瞬时相互作用以促进它们的细胞分布。几种具有抑制能力的物质可以影响这种结合并对细胞造成损害。这个协议允许分析蛋白质是否与肌动蛋白丝或微管相互作用，以及在适用时，控制这种相互作用的条件。该测试基于目标蛋白和细胞骨架丝之间的特异性结合。如实施例图示（见下文）所示，测试从细胞裂解物开始，向其中加入肌动蛋白丝（由单体肌动蛋白产生）。然后孵育混合物（在由操作者选择的不同实验条件下进行），使得感兴趣的蛋白质（在实施例中，肌球蛋白）与肌动蛋白丝结合。然后将样品离心以从肌动蛋白丝分离未结合或弱结合的蛋白质，感兴趣的蛋白质和最终痕量较少特异性的蛋白质与其结合。
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