| Laminarin Quantification in Microalgae with Enzymes from Marine Microbes
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] The marine beta-glucan laminarin is an abundant storage polysaccharide in microalgae. High production rates and rapid digestion by heterotrophic bacteria turn laminarin into an ideal carbon and energy source, and it is therefore a key player in the marine carbon cycle. As a main storage glucan laminarin also plays a central role in the energy metabolism of the microalgae (Percival and Ross, 1951; Myklestad, 1974; Painter, 1983). We take advantage of enzymes that digest laminarin selectively and can thereby quantify only this polysaccharide in environmental samples. These enzymes hydrolyze ...
[摘要] 海洋β-葡聚糖昆布多糖是微藻中丰富的储存多糖。高生产率和异养细菌的快速消化将昆布多糖转化为理想的碳源和能源，因此它是海洋碳循环的关键参与者。作为主要的储存葡聚糖昆布多糖也在微藻的能量代谢中发挥核心作用（Percival and Ross，1951; Myklestad，1974; Painter，1983）。我们利用可以选择性消化昆布多糖的酶，从而可以对环境样品中的这种多糖进行定量。这些酶将昆布多糖水解成葡萄糖和寡糖，用标准的还原糖测定法测定得到昆布多糖浓度。在此测定之前，需要通过异源表达和纯化产生三种酶。该测定可用于监测环境微藻中的昆布多糖浓度，其通过过滤从海水中浓缩，或用来自藻类实验室培养物的样品中浓缩。
【背景】海洋多糖在海洋碳循环中起着重要作用，是浮游植物生理学的重要组成部分，但受到严重影响。几十年来，农业食品工业一直使用基于酶分析的即用试剂盒来分析各种不同的多糖（Whitaker，1974）。这些快速，稳健和特异性的基于酶的方法评估源自陆地植物即淀粉的多糖，因为它们广泛用于食品，饲料和其他工业应用中（Brunt等人， ，1998）。然而，海洋多糖的类似测定仍然缺乏。受到使用酶在藻类中进行多糖定量的想法的启发，我们开发了一种基于酶的方法来量化在硅藻和其他微藻中生态相关的β-葡聚糖昆布氨酸，也称为菊科金刚烷。
这种应用的三种糖苷水解酶（GH）来自福尔摩沙（Formosa）。并且它们的特征如下：FbGH30是GH30家族的外切型β-1,6-葡聚糖酶，特别是水解与昆布多糖骨架连接的β-1,6-连接的葡萄糖单体分支;并且FaGH17A和FbGH17A是GH家族17的两种内作用β-1,3-葡聚糖酶，其特异性地作用于β-1,3-连接的昆布多糖主链上（Becker等人，2017年， ...
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| Preparation of Purified Gram-positive Bacterial Cell Wall and Detection in Placenta and Fetal Tissues
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] Cell wall is a complex biopolymer on the surface of all Gram-positive bacteria. During infection, cell wall is recognized by the innate immune receptor Toll-like receptor 2 causing intense inflammation and tissue damage. In animal models, cell wall traffics from the blood stream to many organs in the body, including brain, heart, placenta and fetus. This protocol describes how to prepare purified cell wall from Streptococcus pneumoniae, detect its distribution in animal tissues, and study the tissue response using the placenta and fetal brain as examples.
[摘要] 细胞壁是所有革兰氏阳性菌表面上的复杂生物聚合物。在感染期间，细胞壁被先天免疫受体Toll样受体2识别，引起强烈的炎症和组织损伤。在动物模型中，从血流到体内许多器官（包括脑，心脏，胎盘和胎儿）的细胞壁运输。该协议描述了如何从肺炎链球菌制备纯化的细胞壁，检测其在动物组织中的分布，并且使用胎盘和胎脑作为实例研究组织反应。
关键词： 细胞壁，肽聚糖，细菌炎症，神经增殖，胎儿神经发生，胎盘运输，Toll样受体2配体，肺炎链球菌
/strong>宿主对感染的反应涉及许多细菌组分的识别，包括细胞壁（CW），一种形成所有革兰氏阳性细菌表面的复合大分子。革兰氏阳性细菌的CW由肽聚糖和磷壁酸的共价网络形成。肺炎链球菌是肺炎，败血症和脑膜炎的主要原因，已经成为研究对包括CW在内的革兰氏阳性细菌感染的先天免疫反应的重要模式生物体。 当肺炎链球菌（肺炎球菌）感染时，CW成分在生长期或抗生素诱导的死亡期间从细菌释放，它在血流中循环并穿过细胞屏障，包括胎盘和血脑屏障。 CW组分具有等于或大于完整细菌的炎性活性（Tuomanen等人，1985a和1985b）。 ...
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| Adherent-invasive Escherichia coli Biofilm Formation Assays
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Author:
Date:
2013-12-05
[Abstract] Patients with Crohn’s disease are abnormally colonized by adherent-invasive Escherichia coli (AIEC) bacteria (Chassaing and Darfeuille-Michaud, 2011). These bacteria are able to adhere to and invade intestinal epithelial cells (IEC), to replicate within macrophages, and were recently described to be able to form biofilms (Martinez-Medina et al., 2009; Chassaing and Darfeuille-Michaud, 2013). The reference strain of adherent-invasive E. coli is the strain LF82, associated with ileal Crohn’s disease (Darfeuille-Michaud et al., 1998).
This protocol ...
[摘要] 克罗恩病患者被粘附侵入性大肠杆菌（AIEC）细菌异常定植（Chassaing和Darfeuille-Michaud，2011）。 这些细菌能够粘附和侵入肠上皮细胞（IEC），在巨噬细胞内复制，并且最近被描述为能够形成生物膜（Martinez-Medina等人，2009; Chassaing和 Darfeuille-Michaud，2013）。 粘附侵入性E的参考应变。 大肠杆菌是与回肠克罗恩病相关的菌株LF82（Darfeuille-Michaud等人，1998）。
该方案描述了生物膜形成测定的基本步骤：I） 非细胞处理的聚苯乙烯微量滴定板和II）多聚甲醛固定的I-407 IEC单层。
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