| Flow Cytometric Quantification of Fatty Acid Uptake by Mycobacterium tuberculosis in Macrophages
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Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] Mycobacterium tuberculosis (Mtb) has evolved to assimilate fatty acids from its host. However, until recently, there was no reliable way to quantify fatty acid uptake by the bacteria during host cell infection. Here we describe a new method to quantify fatty acid uptake by intracellular bacilli. We infect macrophages with Mtb constitutively expressing mCherry and then metabolically label them with Bodipy-palmitate. Following the labeling procedure, we isolate Mtb-containing phagosomes on a sucrose cushion and disrupt the phagosomes with detergent. After extensive washes, the isolated ...
[摘要] 结核分枝杆菌（Mtb）已经发展为从其宿主吸收脂肪酸。然而，直到最近，还没有可靠的方法来量化宿主细胞感染期间细菌对脂肪酸的摄取。在这里，我们描述了一种新的方法来量化细胞内杆菌对脂肪酸的摄取。我们用Mtb组成性表达mCherry感染巨噬细胞，然后用Bodipy-palmitate代谢标记它们。标记程序后，我们在蔗糖垫上分离含有Mtb的吞噬体，并用去污剂破坏吞噬体。大量洗涤后，通过流式细胞术分析分离的细菌以确定与细菌相关的Bodipy-棕榈酸酯信号的水平。使用液体培养物中脂肪酸摄取缺陷的Mtb突变株，我们确定该突变体在巨噬细胞感染期间同化比野生型菌株少10倍的Bodipy-棕榈酸酯。脂肪酸摄取的这种定量方法可用于进一步鉴定参与细胞内Mtb和可能的其他细菌的脂质摄取的途径。
【背景】结核分枝杆菌（Mtb）同化宿主来源的脂质（脂肪酸和胆固醇）的能力使得病原体能够在其宿主内存活（Russell等人，2010; Lovewell 等人，2016）。在小鼠感染期间和在人肺组织中，通过巨噬细胞内的Mtb上调胆固醇和脂肪酸代谢相关基因来支持该想法（Schnappinger等人，2003; Rachman等人，2006; Rohde等人，2007;Fontán等人，2008; Tailleux等人，2008; Homolka et al。，2010; Rohde et ...
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| Adherent-invasive Escherichia coli Biofilm Formation Assays
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Author:
Date:
2013-12-05
[Abstract] Patients with Crohn’s disease are abnormally colonized by adherent-invasive Escherichia coli (AIEC) bacteria (Chassaing and Darfeuille-Michaud, 2011). These bacteria are able to adhere to and invade intestinal epithelial cells (IEC), to replicate within macrophages, and were recently described to be able to form biofilms (Martinez-Medina et al., 2009; Chassaing and Darfeuille-Michaud, 2013). The reference strain of adherent-invasive E. coli is the strain LF82, associated with ileal Crohn’s disease (Darfeuille-Michaud et al., 1998).
This protocol ...
[摘要] 克罗恩病患者被粘附侵入性大肠杆菌（AIEC）细菌异常定植（Chassaing和Darfeuille-Michaud，2011）。 这些细菌能够粘附和侵入肠上皮细胞（IEC），在巨噬细胞内复制，并且最近被描述为能够形成生物膜（Martinez-Medina等人，2009; Chassaing和 Darfeuille-Michaud，2013）。 粘附侵入性E的参考应变。 大肠杆菌是与回肠克罗恩病相关的菌株LF82（Darfeuille-Michaud等人，1998）。
该方案描述了生物膜形成测定的基本步骤：I） 非细胞处理的聚苯乙烯微量滴定板和II）多聚甲醛固定的I-407 IEC单层。
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