| Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) for Studying Sarcomeric Protein Interactions in Drosophila
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Author:
Date:
2020-04-05
[Abstract] Protein-protein interactions in Drosophila myofibrils are essential for their function and formation. Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) is an effective method for studying protein interactions and localization. BiFC relies on the reconstitution of a monomeric fluorescent protein from two half-fragments when in proximity. Two proteins tagged with the different half-fragments emit a fluorescent signal when they are in physical contact, thus revealing a protein interaction and its spatial distribution. Because myofibrils are large networks of interconnected proteins, BIFC ...
[摘要] [摘要] 果蝇肌原纤维中的蛋白质-蛋白质相互作用对其功能和形成至关重要。双分子荧光互补（BiFC ）是研究蛋白质相互作用和定位的一种有效方法。BiFC 依赖于邻近时从两个半片段重构单体荧光蛋白。标记有不同半片段的两种蛋白质在物理接触时会发出荧光信号，从而揭示了蛋白质相互作用及其空间分布。因为肌原纤维相互连接的蛋白质的大型网络中，附设是一种理想的方法来 研究肌原纤维中蛋白质之间的相互作用。在这里，我们提出了一种生成与BiFC 兼容的转基因果蝇的协议，以及一种基于肌原纤维中荧光BiFC 信号的蛋白质-蛋白质相互作用分析方法。我们的方案适用于大多数果蝇蛋白，只需稍加修改即可用于研究任何组织。
[背景] 肉瘤是横纹肌中最小的收缩单位，并沿着肌原纤维的长度以重复的方式延伸（Reedy和Beall，1993）。肉瘤产生肌肉收缩的能力取决于两个肌原纤维成分：细丝和粗丝。肌球蛋白粗丝固定在肌节中心的M线，而肌动蛋白细丝固定在肌节两侧的Z盘上。因此，Z盘对于维持肌原纤维的结构和收缩至关重要，而Z盘无法形成可能导致各种人类肌病的严重缺陷性肌肉表型（Lemke和Schnorrer，2017年）。
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| Rapid IFM Dissection for Visualizing Fluorescently Tagged Sarcomeric Proteins
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Sarcomeres, the smallest contractile unit of muscles, are arguably the most impressive actomyosin structure. Yet a complete understanding of sarcomere formation and maintenance is missing. The Drosophila indirect flight muscle (IFM) has proven to be a very valuable model to study sarcomeres. Here, we present a protocol for the rapid dissection of IFM and analysis of sarcomeres using fluorescently tagged proteins.
[摘要] 肌肉最小的收缩单位肌肉，可以说是最令人印象深刻的肌动球蛋白结构。 然而，缺少对肌节形成和维护的完整理解。 果蝇间接飞行肌肉（IFM）已被证明是研究肌节的一个非常有价值的模型。 在这里，我们提出了快速解剖IFM和使用荧光标记的蛋白质分析肌节的协议。
【背景】能够使横纹肌纤维收缩的细胞骨架结构是数以百计的称为肌原纤维的电缆。肌原纤维又是一系列连续排列的肌节，全部同时收缩。肌节是完美对称的结构，包含收缩所需的所有元素。在肌节的中心位置是M-线，其中肌球蛋白粗丝被锚定。在肌小节的侧面是Z-盘，其中肌动蛋白细丝被锚定。
肌营养不良是导致进行性骨骼肌无力的遗传性疾病（Schröder和Schoser，2009）。对于肌营养不良症，目前尚无法治愈，可能是由于对肌营养不良症基础的分子机制的不完全理解（Olive et al。，2013）。黑腹果蝇是一种有效的遗传模式生物，由于其生命周期短，经济的维护和丰富的可利用资源而被用于研究肌肉生物学（Hales等人，2015; Wangler等，等人，2015年）。
在果蝇中的飞行由间接飞行肌肉（IFM）（苍蝇中最大的肌肉）的同步动作驱动，后者被进一步细分为背纵肌（DLM）和背腹肌（DVM）。 ...
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| Evaluation of Angiogenesis Inhibitors Using the HUVEC Fibrin Bead Sprouting Assay
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Author:
Date:
2016-10-05
[Abstract] Angiogenesis, the growth of new blood vessels from pre-existing vessels, is a critical process that occurs during normal development and tumor formation. Targeting tumor angiogenesis by blocking the activity of vascular endothelial growth factor (VEGF) has demonstrated some clinical benefit; nevertheless there is a great need to target additional angiogenic pathways. We have found that the human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) fibrin bead sprouting assay (FBA) is a robust and predictive in vitro assay to evaluate the activity of angiogenesis inhibitors. Here, we describe an ...
[摘要] 血管发生，来自预先存在的血管的新血管的生长是在正常发育和肿瘤形成期间发生的关键过程。通过阻断血管内皮生长因子（VEGF）的活性靶向肿瘤血管生成已经证明了一些临床益处;然而，非常需要靶向额外的血管生成途径。我们已经发现，人脐静脉内皮细胞（HUVEC）纤维蛋白珠发芽测定（FBA）是评估血管生成抑制剂的活性的稳健的和预测性的体外测定。在这里，我们描述了用于评估血管生成的生物抑制剂和关键终点的自动定量的优化的FBA方案。
[背景] 血管发生，新血管的生长从先前存在的血管，是在伤口愈合和正常发育期间发生的生理过程。血管生成是一个复杂和高度调节的过程，涉及内皮细胞增殖，分化，迁移，基质粘附和细胞间的信号的紧密协调。血管发生也严重参与肿瘤发展和转移。事实上，通过阻断血管内皮生长因子（VEGF）的活性靶向肿瘤血管生成已经证明了临床益处。由于肿瘤最终对VEGF靶向治疗产生抗性，因此非常需要靶向额外的血管生成途径。我们已经发现人脐静脉内皮细胞（HUVEC）纤维蛋白珠发芽测定（FBA）（Nakatsu等人，2007; Nakatsu和Hughes，2008; ...
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