| Lentiviral Barcode Labeling and Transplantation of Fetal Liver Hematopoietic Stem and Progenitor Cells
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Cellular barcoding enables the dissection of clonal dynamics in heterogeneous cell populations through single cell lineage tracing. The labeling of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with unique and heritable DNA barcodes, makes it possible to resolve donor cell heterogeneity in terms of differentiation potential and lineage bias at the single cell level, through subsequent transplantation and high-throughput sequencing. Furthermore, cellular barcoding allows for bona fide hematopoietic stem cells (HSCs) to be defined based on functional rather than immunophenotypic parameters. ...
[摘要] 细胞条形码可以通过单细胞谱系追踪来分离异种细胞群体中的克隆动力学。通过独特和可遗传的DNA条形码对造血干细胞和祖细胞（HSPC）进行标记，可以通过随后的移植和高通量测序，在单细胞水平上分化供体细胞异质性，分化潜力和谱系偏倚。此外，细胞条形码可以根据功能而不是免疫表型参数定义真正的造血干细胞（HSC）。
＆nbsp;该协议描述了慢病毒细胞条形码的工作流程，追踪1450天后（dpc）胎肝（FL）Lineage-Sca+ cKit + （LSK）HSPC经过长期重建（图1）（Kristiansen等人，2016），但可以适应于选择的细胞类型或时间框架。
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图1.实验工作流程摘要（Naik 等人，2013）
最初建立了细胞条形码技术来解决在体内移植造血细胞后的单细胞动力学，并且近年来在移植中对血细胞群体中功能异质性的认识有显着贡献（Schepers ，2008; Gerrits等人，2010; Lu等人，2011; Naik等人 ，2013; Verovskaya等人，2013; ...
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| Culture of Megakaryocytes from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells
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Author:
Date:
2015-11-05
[Abstract] Megakaryocytes are the precursor cells of platelets and are bona fide resident cells in the bone marrow but extremely low in numbers (~1% of total nucleated cells). Upon terminal differentiation, megakaryocytes increase their size, become polyploid and develop a demarcation membrane system. Mature megakaryocytes form proplatelets, which are cytoplasmic extensions that protrude through the endothelial cell layer of venous sinusoids within the bone marrow, entering into the blood circulation and, subsequently, releasing platelets. Despite limited in numbers, megakaryocytes have been ...
[摘要] 巨核细胞是血小板的前体细胞，并且是骨髓中的真正的驻留细胞，但数量非常低（约1％的总有核细胞）。在终末分化时，巨核细胞增加其大小，变成多倍体并形成分界膜系统。成熟巨核细胞形成前血小板，其是突出穿过骨髓内的静脉窦内皮的内皮细胞层的细胞质延伸，进入血液循环并随后释放血小板。尽管数量有限，但已经成功地从骨髓中分离出巨核细胞（Tolhurst等人，2012），成人外周血（Mazur等人，1990; Thornton （2004），以及来自胚胎干细胞（Pick等人，2013）;脐带血（Sun等人，2004） Eto等人，2002）。这些方法依赖于使用针对巨核细胞表面标记（即CD41或CD42b）的抗体来分离富集的巨核细胞群的免疫染色。在这里，我们描述了一种培养方法，其中巨核细胞可以在体外从人外周血单核细胞（PBMC）直接生长和分化，而不需要初始分离CD34 + sup/+细胞。该方法基于先前公开的来自PBMC的人类红细胞祖细胞的培养方法（Borg等人，2010; Leberbauer等人，2005）。尽管在该培养方法中巨核细胞的纯度不是100％，但是可以使用BSA梯度或细胞分选技术进一步分离巨核细胞的富集级分。此外，我们的方法提供了在尚未分化的巨核细胞的最小扩增后冷冻培养物的可能性，与新鲜的不间断培养物相比，其在解冻后将产生相等的巨核细胞培养物。由于这已被证明难以与CD34 + ...
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| Serial Transfer of Human Hematopoietic and Hepatic Stem/progenitor Cells
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Author:
Date:
2013-12-05
[Abstract] A range of assays have been developed to determine the stemness or stem cell activity of human stem cells. The key assays of stem cells are functional: they must show self-renewal and the ability to generate the appropriate tissue. The best assays available to study this property in putative human stem cells involve xeno-transplantation into immune-deficient mice. Demonstration of both long-term (2-3 months) multi-lineage reconstitution of human blood or liver in a murine host and the ability of the putative stem cells to mediate reconstitution of a secondary host upon re-isolation from the ...
[摘要] 已经开发了一系列测定来确定人类干细胞的干细胞或干细胞活性。 干细胞的关键测定是功能性的：它们必须显示自我更新和产生适当组织的能力。 用于在推定的人类干细胞中研究该特性的最佳测定涉及到免疫缺陷小鼠的异种移植。 在鼠宿主中长期（2-3个月）多谱系重建人血液或肝脏以及当从初级小鼠再分离时推定干细胞介导次级宿主重建的能力一般 被接受为证明人造血干细胞和肝干细胞存在的金标准。 在这里，我们描述了用来自人胎儿肝脏的CD34 +干细胞重建NOD-scid IL-2Rγ（NSG）小鼠的方法和CD34 + 细胞进行连续移植。
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