| Dissection and Whole Mount Staining of Retina from Neonatal Mice
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Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract] Here we provide a detailed protocol for whole mount staining of mouse retina. This protocol was used to analyze retinal angiogenesis in newborn mice (Sawaguchi et al., 2017) by modifying the original protocols (Powner et al., 2012; Tual-Chalot et al., 2013). This protocol can also be used for whole mount staining of adult retina.
[摘要] 在这里，我们提供了小鼠视网膜整体染色的详细方案。 该方案用于分析新生小鼠的视网膜血管生成（Sawaguchi et al。，2017），修改原始方案（Powner et al。，2012; Tual-Chalot et al。，2013）。 该方案也可用于成人视网膜的整体染色。
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| Artificial Inhalation Protocol in Adult Mice
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Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] Research in the area of in vivo olfactory physiology benefits from having direct access to the nasal airways through which odorants can be presented. Ordinarily, the passage of odorants through the airways is controlled by respiratory rhythm. This fact makes it difficult to control the timing and strength of an olfactory stimulus, since animals must breathe regularly, and the act of breathing itself also controls odorant presentation. However, using an artificial inhalation preparation allows us to decouple breathing from olfaction. With this technique we present oxygen and ...
[摘要] 在体内嗅觉生理学领域的研究得益于直接进入可以呈现有气味剂的鼻气道。 通常，气味通过呼吸道的通道由呼吸节律控制。 这一事实使得难以控制嗅觉刺激的时间和强度，因为动物必须经常呼吸，并且呼吸本身的行为也控制气味呈现。 然而，使用人工吸入制剂可以让我们将呼吸与嗅觉分离。 通过这种技术，我们可以直接向肺部提供氧气和麻醉剂（如果需要），并独立控制气味剂进入鼻腔。 该技术允许直接控制体内气味物质，在研究嗅觉处理时能够更精确地控制刺激参数。 该技术可具有其他应用，例如在雾化药物递送中。
【背景】 嗅觉，雾化药物递送以及气道加湿和体内平衡的许多方面由通过鼻道的主动呼吸控制。对这些领域的基础研究得益于能够在麻醉制剂中主动控制呼吸。我们的实验室部分侧重于呼吸控制如何控制嗅球中的嗅觉编码，嗅球是气味感知神经生物学中第一个突触的位点。为了解决麻醉小鼠在这方面的问题，我们采用了一种人工呼吸策略，将通过鼻腔的气流与肺部气体交换分离。这种类型的制剂允许实验性地操纵鼻腔气流，同时将氧合空气（通常掺入稀释的雾化全身麻醉剂）输送到肺部，从而产生可持续8小时或更长时间的稳定的体内制剂。
该协议是从之前的出版物中简要概述的早期形式修改的（Wachowiak和Cohen，2001;Vučinić et ...
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| Isolation of Murine Brain and Lung Microvascular Endothelial Cells
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] This protocol describes how to isolate murine endothelial cells from newborn mice brain and 3-month-old mice lung by modifying the original protocols (Sobczak et al., 2010; Ruck et al., 2014). We have used the protocol to analyze mRNA expression level in brain endothelial cells (Sawaguchi et al., 2017). Isolated lung endothelial cells were expanded in vitro for various downstream experiments such as gene expression analysis and cell-based signaling assay.
[摘要] 该协议描述了如何通过修改原始方案从新生小鼠脑和3个月大的小鼠肺中分离鼠内皮细胞（Sobczak et al。，2010; Ruck et al。，2014）。 我们使用该方案分析脑内皮细胞中的mRNA表达水平（Sawaguchi et al。，2017）。 分离的肺内皮细胞在体外扩增用于各种下游实验，例如基因表达分析和基于细胞的信号传导测定。
【背景】 该方案描述了从小鼠脑和肺中分离鼠内皮细胞的实验程序。 我们使用新生小鼠使用抗CD31抗体分离脑内皮细胞。 使用该方案，可以从脑内皮细胞中分离出适合于基因表达分析的2μg总RNA，尽管不能完全消除周细胞和星形胶质细胞。 我们还使用3个月大的小鼠肺使用抗CD31和抗CD102抗体分离肺内皮细胞。 将分离的肺内皮细胞在体外6cm培养皿中扩增，并用于各种下游实验，例如基因表达分析和基于细胞的信号传导测定。
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