| Protease Activity Assay in Fly Intestines
|
|
Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] The intestine is a central organ required for the digestion of food, the absorption of nutrients and for fighting against aggressors ingested along with the food. Impairment of gut physiology following mucosal damages impacts its digestive capacities that consequently will affect growth, wellbeing or even survival of the individual. Hence, the assessment of intestinal functions encompasses, among others, the monitoring of its integrity, its cellular renewing, its immune defenses, the production of enteroendocrine hormones and its digestive capacities. Here, we describe in detail how to assess ...
[摘要] 肠是消化食物所需的中枢器官，吸收营养物质，并与食物一起摄入的侵略者作斗争。 粘膜损伤后的肠道生理损伤影响其消化能力，从而影响个体的生长，健康甚至生存。 因此，肠功能的评估包括监测其完整性，细胞更新，免疫防御，肠内分泌激素的产生及其消化能力。 在这里，我们详细描述如何评估分泌在成年果蝇的肠腔中的蛋白酶的活性。 这种方法也可以用于幼虫肠。 本协议由“蛋白酶荧光检测试剂盒”（产品代码PF0100）中提出的Sigma-Aldrich公司的方案进行了改进和改进。
【背景】肠道受到诸如斋戒，禁食，化学物质，病原体，损伤等诸多压力的影响。肠道能够通过保持其体内平衡的生理平衡来克服这种压力。为了感知进入的压力并产生适应性的维持肠功能的答案，肠已经开发出强健和保守的机制，如局部先天免疫防御和组织再生（Royet和Charroux，2013; Bonfini等，2016）。然而，在某些情况下，肠道稳态的维持可能受到影响。例如，在老化期间，随着许多未成熟或分化不良的细胞的存在，组织稳态维持总体下降（Jasper，2015; ...
|
|
|
| Physical Removal of the Midbody Remnant from Polarised Epithelial Cells Using Take-Up by Suction Pressure (TUSP)
|
|
Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] In polarised epithelial cells the midbody forms at the apical cell surface during cytokinesis. Once severed, the midbody is inherited by one of the daughter cells remaining tethered to the apical plasma membrane where it participates in non-cytokinetic processes, such as primary ciliogenesis. Here, we describe a novel method to physically remove the midbody remnant from cells and assess the possible effects caused by its loss (Bernabé-Rubio et al., 2016).
[摘要] 在极化上皮细胞中，胞质在细胞分裂过程中在顶端细胞表面形成。 一旦切断，中间体被遗留于其中参与非细胞运动过程（例如初级细胞发生）的顶端质膜的其中一个子细胞遗传。 在这里，我们描述了一种从细胞中物理去除中间体残留物并评估其损失所引起的可能影响的新方法（Bernabé-Rubio et al。，2016）。
【背景】中间体或Flemming体是在有丝分裂的最后阶段在子细胞之间形成的细胞间桥的中心部分。通过运输（ESCRT）机器所需的内体分选复合体，桥梁两侧的脱落导致两个子细胞的物理分离（Green等，2012）。除了其在有丝分裂调节中的已知功能外，最近的研究已经开始阐明中间体后有丝分裂后的作用。由于其在肾细胞中腔内形成的启动中的作用，中间体被假定为极性提示（Li等，2014）。最近，已经证明，中间体残留物通过极化的Madin-Darby犬肾（MDCK）细胞（Bernabé-Rubio等，2016）直接参与初级细胞发生。还发现在秀丽隐杆线虫（Singh and Pohl，2014）的发展过程中以及在确定细胞命运和分化过程中，形成背轴的作用（Kuo et al。，2011）。以前的研究使用激光消融来损害中间体残留的功能。然而，当在培养的细胞系中进行时，由于质膜和近端胞质元件的损伤，激光烧蚀可导致细胞死亡。因此，我们设计了一个温和的程序，我们称之为“抽吸压力”（TUSP）。 ...
|
|
|
| Ex vivo Culture of Adult Mouse Antral Glands
|
|
Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] The tri-dimensional culture, initially described by Sato et al. (2009) in order to isolate and characterize epithelial stem cells of the adult small intestine, has been subsequently adapted to many different organs. One of the first examples was the isolation and culture of antral stem cells by Barker et al. (2010), who efficiently generated organoids that recapitulate the mature pyloric epithelium in vitro. This ex vivo approach is suitable and promising to study gastric function in homeostasis as well as in disease. We have adapted Barker’s protocol to ...
[摘要] 为了分离和表征成年小肠的上皮干细胞，最初由Sato等人（2009）描述的三维培养物已经随后适应于许多不同的器官。其中一个例子是Barker等人（2010）分离和培养窦性干细胞，他们有效地产生了在体外重现成熟幽门上皮的组织细胞。这种“离体”方法是适合的，并且有希望研究体内平衡和疾病中的胃功能。我们已经调整了Barker的方案来比较稳态和再生组织，这里，我们一步一步地仔细地描述了窦腺的分离和培养，以及从细胞分选后可能用于培养的窦腺中分离单细胞一个例子（Fernandez Vallone等人，2016）。
背景来自腺体的小鼠成体干细胞可以在3D matrigel中离体生长，作为“迷你腺体”无限期（Barker等人，2010） 。与EGF，Noggin和R-spondin 1存在下生长的小鼠成年小肠的干细胞相比，胃干细胞需要进一步补充Fgf10，胃泌素，Wnt3a和更高浓度的R-螺旋菌素1（称为作为ENRFGW）获得生产性文化。直到最近，在干细胞消融后，在离体培养系统中成体再生窦腺是否生长，如果是这样，仍然是未知的。使用本方案，证明了内源性和再生的腺体在接种时不会类似地生长并且表现出不同的生长培养要求。
|
|
|